PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

根瘤菌属Sheep ApoF (Apolipoprotein F) ELISA Kit 拉丁属名: Rhizobium  sp.

弯孢菌Sheep GP4 (Platelet Membrane Glycoprotein IV) ELISA Kit用途: 研究

红酵母属Sheep FOXP1 (Forkhead Box Protein P1) ELISA Kit 拉丁属名: Rhodotorula  sp.

球孢白僵菌Sheep ECM1 (Extracellular Matrix Protein 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

松杉灵芝Sheep PAR2 (Protease Activated Receptor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Ganoderma tsugae Murrill

腐皮镰孢Sheep HSP-70/HSPA9 (Heat Shock Protein 70) ELISA Kit拉丁属名: Fusarium solani

灰树花（可订购）斜面形式Sheep UCP-2 (Uncoupling Protein 2, Mitochondrial) ELISA Kit拉丁属名: Grifola frondosa (Fr.) S.F.Gray

聚生壳菌Sheep CETP (Cholesteryl Ester Transfer Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

孟氏假单胞菌Sheep GzmB (Granzyme B) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  mandelii

葡萄座腔菌Sheep CC16 (Clara Cell 16KD Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Botryosphaeria dothidea

罗伊氏乳杆菌Sheep PGD2-MOX (Prostaglandin D2-Methoxime) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  reuteri

粉红铆钉菇Sheep AGT (Angiotensinogen) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黄孢平革菌Sheep TSA (Thyroid Stimulating Antibody) ELISA Kit用途: 红麻制浆

大肠埃希菌Sheep Alk-Smase (Alkaline Sphingomyelinase) ELISA Kit拉丁属名: coli

酿酒酵母Sheep FABP5 (Fatty Acid Binding Protein 5, Epidermal ) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae
气管比翼线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 ZNF532 英文名称： 锌指蛋白532 0.2ml

DR3 英文名称： 死亡受体3 0.1ml

极光激酶B Anti-Aurora B 0.1ml

ENPP6 英文名称： 磷酸酶/磷酸二酯酶家族成员6 0.2ml

三磷酸腺苷结合盒亚家族G1 Anti-ABCG1 0.1ml

Anti-WWOX /FITC 荧光素标记包含氧化还原酶的WW域IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-FLT3 (Tyr969) 磷酸化FMS样酪氨酸激酶3 规格 0.1ml

CCDC58 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白58 0.2ml

Anti-FOXJ1/HFH-4 叉头蛋白J1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

CTAP III (Human connective tissue-activating peptide III ,CTAP III ) ELISA Kit 人结缔组织活化肽ⅢMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-FOXF1 叉头蛋白F1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rabbit IgG/AP 碱性磷酸酶(AP)标记的小鼠抗兔IgG 规格 0.1ml

UFC(Human urinary free cortisol) ELISA Kit 人尿游离皮质醇 96T

SP-A 英文名称： 肺表面活性蛋白A 0.1ml

人细胞毒素(CTX)ELISA试剂盒 英文名称：Human cytotoxin,CTX ELISA Kit特价促销

人细胞毒素相关蛋白A(CagA)ELISA试剂盒 英文名称：Human Cytotoxin-associated protein,CagA ELISA Kit特价促销

人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA试剂盒 英文名称：Human cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4,CTLA-4 ELISA Kit特价促销

人细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA试剂盒 英文名称：Human intercellular adhesion molecule 1，ICAM-1 ELISA Kit特价促销

PAR-2 (Protease-activated receptors-2) 蛋白酶激活受体-2抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-phospho-ATF2(Thr69/71) 磷酸化活化复制因子2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-APE(Ser1417) 磷酸化肌动蛋白结合蛋白Girdin 规格 0.1ml

COMP 英文名称： 软骨寡聚基质蛋白 0.1ml

Anti-phospho-ASK1(Thr845) 磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

SLPI(Human secretory leukocyte protease inhibitor) ELISA Kit 人分泌性白细胞蛋白酶抑制因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-PKA C (Thr197) 磷酸化蛋白激酶C亚性Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HIP4/CBS 丝氨酸羧甲半胱氨酸合成酶 规格 0.1ml

Gelsolin ELISA Kit 大鼠凝溶胶蛋白 96T

PP2A beta 英文名称： 蛋白质磷酸酶2B PP2A β PP2A-β 0.1ml