PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

酿酒酵母Sheep BACE2 (β-site APP Cleaving Enzyme 2) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

赭曲霉Sheep Aβ1-40 (Amyloid Beta Peptide 1-40) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus ochraceus

Burkholderia sp. Sheep Pro-MMP-13 (Pro-Matrix Metalloproteinase 13) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

杂色曲霉Sheep VEGFR1/Flt1 (Vascuoar Endothelial Growth Factor Receptor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus versicolor

Asticcacaulis?Sheep PDXK (Pyridoxal Kinase) ELISA Kit拉丁属名: Asticcacaulis? Asticcacaulis?

中国农大湖积物杆菌Sheep POMC (Pro-Opiomelanocortin) ELISA Kit拉丁属名: Lacibacter cauensis

克鲁斯假丝酵母Sheep PAR4 (Protease Activated Receptor 4) ELISA Kit 拉丁属名: Candida krusei

Sheep GATA3 (GATA Binding Protein 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉Sheep Cys-C (Cystatin C) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus niger van Tieghem

枯斑拟盘多毛孢Sheep IGFBP-7 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 7) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

暗黄紫色小单孢菌Sheep GAL (Galanin) ELISA Kit拉丁属名: Micromonospora fulvoviolacea

HLE（人细胞（未分化））Sheep TXB2 (Thromboxane B2) ELISA Kit拉丁属名: HLE（人细胞（未分化））

根瘤菌Sheep β2-GP (Beta2 Glycoprotein) ELISA Kit用途: 固氮

根瘤菌Sheep AGGF1 (Angiogenic Factor with G Patch and FHA Domains 1) ELISA Kit用途: 固氮

贝氏隐饱子虫Sheep PC/CPG (Choline Phosphoglyceride) ELISA Kit拉丁属名: baileyi
链霉菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒 ARHI 英文名称： 基因ras同源家族1 0.2ml

Anti-Bcl-10/CLAP/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠Bcl-10IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

KLH ELISA Kit 小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-BNP/FITC 荧光素标记脑钠素IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh EphB2/Eph receptor B2 酪氨酸蛋白激酶受体B2 规格 0.1ml

Rat Progesterone receptor,PROGR ELISA kit 小鼠孕酮受体 96T

Myoglobin 英文名称： 肌红蛋白 0.1ml

CCDC39 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白39 0.2ml

Anti-KLK4 激肽释放酶4Multi-class antibodies规格： 0.1ml

mIgM(Human membrane IgM) ELISA Kit 人表面膜免疫球蛋白MMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-PSD93 突触后密度蛋白93Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh HCMV 人巨细胞病毒 规格 0.1ml

HABP(Human Hya]uronate binding protein) ELISA Kit 人透明质酸结合蛋白 96T

PEDF 英文名称： 色素上皮源性因子 0.1ml

尼龙膜(带正电荷)(30cm×3m 0.45um) 1卷 Amersham

ZNF274 英文名称： 锌指蛋白274 0.2ml

DCLREC1C 英文名称： DNA交联修复蛋白1C 0.2ml

骨成型蛋白受体1A Anti-BMPR-1A 0.1ml

EphB2 英文名称： 酪酸蛋白激酶受体B2 0.1ml

Caspase 激活的脱氧核糖核酸酶 Anti-CAD/CPAN 0.1ml

Anti-Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr1571)/FITC 荧光素标记磷酸化马铃薯球蛋白(性硬化)IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Collagen II 英文名称： Ⅱ型胶原α1蛋白/软骨钙素 0.1ml

Anti-FSH 促卵泡刺激素Multi-class antibodies规格： 0.2ml

LTD4(Human leukotriene D4) ELISA Kit 人白三烯D4Multi-class antibodies规格： 48T

ANti-FHIT 脆性组氨酸三联体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的小鼠抗人IgM 规格 0.1ml

CpG-ODN(Human CpG oligodeoxynucleotide) ELISA Kit 人未甲基化寡聚脱氧核苷酸 96T

SLITRK3 英文名称： 神经突触相关蛋白SLITRK3 0.1ml