PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

淡黄青霉CNTNAP2 (Contactin Associated Protein Like Protein 2) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium luteum

槐栓菌ACP1 (Acid Phosphatase 1) ELISA Kit拉丁属名: Trametes robiniophila

枯草芽胞杆菌F13B (Coagulation Factor XIII B Polypeptide) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

芽孢杆菌ASM (Acid Sphingomyelinase) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus alkaliluris

维多利亚维希尼克氏酵母IGFBP-4 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 4) ELISA Kit拉丁属名: Vishniacozyma victoriae

微小链霉菌PPIL1 (Peptidylprolyl Isomerase/Cyclophilin Like 1) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces parvulus

细小砖红镰孢菌PLTP (Phospholipid Transfer Protein) ELISA Kit 用途: 植物病原物，用于该菌种群遗传学研究；为该病防治提供依据

沼泽类芽孢杆菌KLK7 (Kallikrein 7) ELISA Kit拉丁属名: Paenibacillus aestuarii

不动杆菌CA6 (Carbonic Anhydrase VI) ELISA Kit用途: 微生物肥料

黄曲霉UCP-2 (Uncoupling Protein 2, Mitochondrial) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus flavus

大肠埃希氏菌GMP-140 (Alpha-granular Membrane Protein) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

酿酒酵母MBP (Myelin Basic Protein) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

香菇TM (Thrombin)ELISA Kit拉丁属名: Lentinula  edodes

大肠埃希氏菌TAF13 (TATA Box Binding Protein Associated Factor 13) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

英诺克李斯特氏菌CASP10 (Caspase 10) ELISA Kit拉丁属名: Listeria  innocua
海豚链球菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书人髓样分化因子初次应答基因88(MYD88)ELISA试剂盒英文名称：human myeloid differentiation primary response gene 88,MYD88 ELISA Kit特价促销

人他克莫司(FK506)ELISA试剂盒 英文名称：Human Tacrolimus-FK506 ELISA Kit特价促销

PDCD4(programmed cell death 4) 凋亡相关蛋白4抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-ATP2c1 钙离子ATP酶通道蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-Androgen Receptor(Ser595) 磷酸化雄激素受体 规格 0.1ml

Perforin 浓缩液 0.1ml 进口分装

UBE3A 英文名称： 人状瘤病毒E6相关蛋白 0.2ml

CCDC153 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白153 0.2ml

Anti-Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) 磷酸化原活化蛋白激酶激酶4Multi-class antibodies规格： 0.1ml

PTGDS(Human Prostaglandin D synthase) ELISA Kit 人素D合成酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-MyoD1/Myf3 肌原调节蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh ILT2/CD85j 细胞表面免疫球蛋白样转录因子2 规格 0.2ml

PLGF ELISA Kit 大鼠胎盘生长因子 96T

PPP4C 英文名称： 磷酸酯酶-2Ac 0.1ml

Human ox-LDL ELISA Kit 人氧化 96T

TPSB2 英文名称： 肥大细胞类胰蛋白酶β2 0.1ml

C6orf191 英文名称： 6号染色体开放阅读框191 0.2ml

Anti-CNR-1 钙粘蛋白相关的神经受体1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

猪超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒英文名称：Porcine Super Oxidase Dimutase,SOD ELISA Kit特价促销

猪病毒(TGEV)ELISA试剂盒英文名称：Porcine Transmissible Gastroenteritis virus antibody,TGEV ELISA Kit进口/原装

猪雌二醇(E2)ELISA试剂盒英文名称：Porcine Estradiol,E2 ELISA Kit特价供应

CNR2 英文名称： 钙粘蛋白相关的神经受体2 0.1ml

Anti-Haase 透明质酸酶/玻璃酸酶Multi-class antibodies规格： 0.2ml

6-OHDA(Human 6-hydroxydopamine) ELISA Kit 人6-羟多巴胺Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-HADHSC (human) 短链L-3羟烷基辅酶A脱氢酶(人)Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MLT5 特异性MLT5蛋白 规格 0.2ml

Human Methylase ELISA Kit 人甲基化酶 96T

phospho-Rab24(Ser95) 英文名称： 磷酸化ras基因相关蛋白Rab24 0.1ml