PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
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苏云金芽胞杆菌MT3 (Metallothionein 3) ELISA Kit 用途: 用于抗虫基因的分离和抗虫相关基础研究。

海洋交替赤杆菌C4b (Complement Component 4b) ELISA Kit拉丁属名: Altererythrobacter marinus

假单胞菌GAD-Ab (Anti-Glutamic Acid Decarboxylase antibody) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  extremaustralis

苹果壳囊孢LCN1 (Lipocalin 1) ELISA Kit用途: 代谢产物

枯草芽孢杆菌ATF7 (Activating Transcription Factor 7) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

酿酒酵母PI3K2α (Phosphoinositide-3-Kinase Class-2-Alpha Polypeptide) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

薛瓦酵母GJβ1 (Gap Junction Protein Beta 1) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  chevalieri

酿酒酵母CYFRA21-1 (Cytokeratin Fragment Antigen 21-1) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

大豆慢生根瘤菌GH (Growth Hormone) ELISA Kit用途: 与大豆共生固氮,培养基pH4.2生长

尖镰孢RETN (Resistin) ELISA Kit 用途: 教学科研

拟青霉HP (Haptoglobin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

芽孢杆菌属SSTR1 (Somatostatin Receptor 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  sp.

模拟乳粉蜡样芽胞杆菌质控样品（定量）IL-17 (Interleukin 17) ELISA Kit拉丁属名: 模拟乳粉蜡样芽胞杆菌质控样品（定量）

侧耳FGF21(Fibroblast Growth Factor 21) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黄绿木霉MSP (Macrophage Stimulating Protein) ELISA Kit用途: 教学科研
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TPH 英文名称： 色酸羟化酶 0.1ml

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Rhesus antibody Rh MARCH3 膜相关环指蛋白3 规格 0.2ml

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