PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

庆笙红球菌COL4 (Collagen Type IV) ELISA Kit拉丁属名: Rhodococcus qingshengii

丝状链霉菌NAP3 (Neutrophil Activating Protein 3) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces filamentosus

枯草芽孢杆菌LIPC (Lipase, Hepatic) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

琉球曲霉Grb10 (Growth Factor Receptor Bound Protein 10) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus luchuensis

松针散斑壳MN (Metanephrine) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

产黄青霉DCLK1 (Doublecortin Like Kinase 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

ATCC 14025IL-12 p40 (Interleukin 12 p40) ELISA Kit拉丁属名: Enterococcus avium

密黄红菇VPI (Vasoactive Peptidase Inhibitors) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

辉光柄菇*Trx (Thioredoxin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

普通裂褶菌AGT (Angiotensinogen) ELISA Kit用途: 资源真菌

多主壳菌PROZ (Protein Z) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

链孢囊菌PPP1R1A (Protein Phosphatase 1 Regulatory Subunit A) ELISA Kit用途: 代谢产物具有活性。

小孢根霉PIAS3 (Protein Inhibitor of Activated STAT3) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus microsporus

RudaeaPDIA6 (Protein Disulfide Isomerase A6) ELISA Kit拉丁属名: Rudaea cellulosilytica

桑叶刺盘孢ABCA1(ATP-binding cassette transporter A1) ELISA Kit拉丁属名: Colletotrichum morifolium Hara
中华根瘤菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书小鼠高铁血红蛋白(MHB)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse Methemoglobin,MHB ELISA Kit 特价促销

小鼠睾酮(T)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Testoterone,T ELISA Kit进口/分装

规格:96T小鼠钩端螺旋体IgG(Lep IgG)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse Leptospira IgG,Lep IgG ELISA Kit 进口/原装

小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N ELISA Kit 特价供应

Caspase-10 人Caspase-10Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-DC-SIGN/CD209 细胞间粘附分子非整合素蛋白3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Nesfatin-1/Nucb2 新的饱食分子蛋白 规格 0.2ml

CBP 英文名称： CREB结合蛋白 0.1ml

Anti-Caspase-13/4 半胱胺酸蛋白酶蛋白-13Multi-class antibodies规格： 0.2ml

CD169/sialoadhesin(Sn)(Sialic acid-binding Ig-like lectin 1;Siglec-1) CD169抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CCL13/MCP-4 单核细胞趋化蛋白4Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PCDHA12 原钙粘蛋白12 规格 0.2ml

ICAM3 Kit Human 人 CD50 / ICAM-3 ELISA配对 ELISA

phospho-Tau protein(Ser199) 英文名称： 磷酸化微管相关蛋白 0.1ml

小鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Stromal cell derived factor 1a,SDF-1a ELISA Kit特价促销

小鼠基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Stromal cell derived factor 1β,SDF-1β ELISA Kit 特价供应

小鼠己糖激酶(HK)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Hexokinase,HK ELISA Kit特价促销

小鼠甲基化酶(Methylase)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Methylase ELISA Kit 　进口/分装

Human arabinogalactan proteins,AGPs ELISA Kit 人阿拉伯半乳糖蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-Src(Tyr529) 磷酸化Src原癌基因Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-human IgM/RBITC 罗丹明标记的羊抗人IgM 规格 0.3ml

CLPS 英文名称： 胰辅脂酶 0.2ml

Anti-Egr-1 早期生长应答蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Mouse Endostatin 小鼠内皮抑素Multi-class antibodies规格： 96T

Anti-ETK/BMX 非受体性蛋白酪氨酸激酶ETKMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MrpL28 线粒体核糖体蛋白L28 规格 0.1ml

SP1/PS Beta1-G(Human Pregnancy Specific Beta1Glycoprotein) ELISA Kit 人特异性β1糖蛋白 96T

phospho-Syntaxin 1a(Ser188) 英文名称： 磷酸化突触融合蛋白1 0.1ml