PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

榛色青霉COL17 (Collagen Type XVII) ELISA Kit拉丁属名: Hamigera avellanea

丝兰轮纹斑菌PRSS23 (Protease, Serine 23) ELISA Kit 用途: 植物病原物，为该病防治提供依据

块鳞灰毒伞VDR (Vitamin D Receptor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

金黄色葡萄球菌MMSAM (Melanoma Metastasis Surface Adhesion Molecule) ELISA Kit 拉丁属名: Staphylococcus  aureus

*灰葡萄孢ERCC1 (Excision Repair Cross Complementing Rodent Repair Deficiency Complementation 1) ELISA Kit拉丁属名: Botrytis cinerea Pers.

产单核细胞李氏杆菌FBLN4 (Fibulin 4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

产气荚膜梭菌 毒素E型C/EBPδ (CCAAT/Enhancer Binding Protein, Delta) ELISA Kit规格: 冻干物

多产色链霉菌ADCY2 (Adenylate Cyclase 2) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces polychromogenes

双孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)TNNC2 (Troponin C Type 2) ELISA Kit 拉丁属名: Agaricus bisporus (Lange) Singer

新月弯孢FGFR2 (Fibroblast Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Curvularia lunata

博斯氏菌属NUP160 (Nucleoporin 160kDa) ELISA Kit拉丁属名: Bosea  lathyri

茶藨子葡萄座腔菌ERK1 (Extracellular Signal Regulated Kinase 1) ELISA Kit用途: 用于该菌种群遗传学研究及与苹果轮纹、干腐、杨梅和石榴流胶、猕猴桃腐烂等病菌系统学研究

拟可可毛球二孢CYSLTR2 (Cysteinyl Leukotriene Receptor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Lasiodiplodia pseudotheobromae

嗜糖土地芽孢杆菌Ly6a (Lymphocyte Antigen 6 Complex Locus A) ELISA Kit拉丁属名: Terribacillus saccharophilus

乳杆菌属CENPE (Centromere Protein E) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus  sp.
羊血吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒供应商小鼠样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Insulin-like growth factor 1,IGF-1 ELISA Kit 进口/分装

Testosterone 人睾酮Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Connexin-45 间隙连接蛋白45Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NHE1/APNH1 钠氢通道蛋白 规格 0.2ml

Human scavenger receptor B,SRB ELISA Kit 人清道夫受体B 96T

Transglutaminase 英文名称： 谷酰胺转胺酶1 0.1ml

CHMP6 英文名称： 染色质修饰蛋白CHMP6 0.1ml

Cathepsin D 英文名称： 组织蛋白酶D 0.1ml

Anti-IGFBP1 样生长因子结合蛋白-1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

B7-2/sCD86(Human soluble Cluster of differentiation 86) ELISA Kit 人可溶性CD86Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-GCN2 蛋白激酶GCN2蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgG(3D3)/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的鼠抗人IgG单克隆 规格 0.1ml

ADAMTS4(Human ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif4) ELISA Kit 人ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4 96T

Phospho-RIP2 (Ser176) 英文名称： 磷酸化受体结合丝酸苏酸激酶2 0.1ml

鸡可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒英文名称：Chicken Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1,sICAM-1 ELISA Kit 进口/原装

鸡可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒英文名称：Chicken soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA Kit特价供应

鸡IgG(JE IgG)ELISA试剂盒英文名称：Chicken Japanese Encephalitis IgG,JE IgG ELISA Kit 进口/原装

鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)ELISA试剂盒英文名称：Hen egg Immunoglobulin of Yolk,IgY ELISA Kit进口/分装

IGFBP-2 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 2) 样生长因子结合蛋白-2(多肽)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-AHA3 AHA3(拟南芥)Multi-class antibodies规格： 1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-CEBP alpha (Ser21) 磷酸化转录调节因子CEBP α  规格 0.1ml

CLIC1 英文名称： 氯离子通道蛋白27 0.1ml

Anti-GTSE-1 G2期/S期应答相关蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Human Pancreatic carcinoma markers-CA242 ELISA Kit 人标志物CA242Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-HOXB4 HOXB4Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MCP1/CCL2 单核细胞趋化蛋白1 规格 0.1ml

BACE1(Human Beta-site APP-Cleaving Enzyme 1) ELISA kit 人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1 96T

ROBLD3 英文名称： 胞内接头蛋白P14 0.1ml