PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

美澳型核果褐腐病菌HCCS (Holocytochrome C Synthase) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

猪丝菌CA3 (Carbonic Anhydrase III, Muscle Specific) ELISA Kit拉丁属名: rhuriopathiae

雅致栓孔菌MCP-3 (Monocyte Chemotactic Protein 3) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

东方伊萨酵母CTAGE (Cutaneous T-Cell Lymphocyte Associated Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Issatchenkia  orientalis

白浅灰链霉菌CFP (Complement Factor P) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces albogriseolus

纳瓦河部落奇异球菌CDK6 (Cyclin Dependent Kinase 6) ELISA Kit拉丁属名: Deinococcus navajonensis

绿色链霉菌IgA1 (Immunoglobulin A1) ELISA Kit 用途: 代谢产物具有活性。

小孔异担子菌ANG (Angiostatin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

洛格酵母PLA2G12B (Phospholipase A2, Group XII B) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  logos

黑曲霉DPYD (Dihydropyrimidine Dehydrogenase) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

贝伦格勒座腔菌梨专化型EED (Embryonic Ectoderm Development) ELISA Kit 用途: 植物病原物；用于Botryosphaeria系统学研究。

海南吉尔霉REN (Renin) ELISA Kit用途: 饲料用酶的筛选

pLCDH-ciRFSCN (Fascin) ELISA Kit拉丁属名: 宿主：DH5α，BL21

甜芝(灵芝属之一种)ApoB100 (Apolipoprotein B100) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

谷氨酸棒杆菌Ⅲ型MYH9 (Myosin Heavy Chain 9, Non Muscle) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum
疥螨通用探针法荧光定量PCR试剂盒规格ZBTB3 英文名称： 锌指蛋白ZBTB3 0.2ml

DCTN1 英文名称： 动力蛋白激活蛋白1 0.1ml

RHOA RhoA 兔单抗 (FITC) Human

EPDR1 英文名称： 哺乳动物室管膜相关蛋白1 0.2ml

谷氨酸受体2D Anti-NR2D/NMDAR2D 0.2ml

Anti-SLC39A6/FITC 荧光素标记SLC39A6IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-p38 MAPK/MAPK14(Thr180/Tyr182) 磷酸化原活化蛋白激酶p38 规格 0.1ml

CASPR 英文名称： 轴突蛋白4/少突胶质细胞 0.2ml

Anti-ET-1 内皮素-1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

CTLA-4 大鼠细胞毒T淋巴细胞相关抗原4Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Endo G 核酸内切酶GMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MUSK 肌肉骨骼受体酪氨酸激酶 规格 0.1ml

PAC3(Human platelet-associated Complement 3) ELISA Kit 人血小板相关补体3 96T

SEMA4D 英文名称： 跨膜蛋白SEMA4D 0.2ml

C1orf114 英文名称： 1号染色体开放阅读框114 0.2ml

Anti-Claudin 1 紧密连接蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

小鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse Helicobacter pylori IgG,Hp-IgG ELISA Kit进口/分装

小鼠游离睾酮(F-TESTO)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Free Testoterone,F-TESTO ELISA Kit特价供应

小鼠游离甲状腺素(FT4)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Free Thyroxine,FT4 ELISA Kit进口/原装

小鼠游离三碘甲状腺原氨酸(Free-T3)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Free Tri-iodothyronine Indes,Free-T3 ELISA Kit特价促销

小鼠游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒英文名称：Mouse free fatty acids,FFA ELISA Kit特价供应

CLCN3 英文名称： 氯离子通道蛋白3 0.2ml

Anti-IL-20RB/IL-20R2 白介素20受体β链Multi-class antibodies规格： 0.2ml

NAIP(Human neuronal apoptosis inhibitory protein) ELISA Kit 人神经元凋亡抑制蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型病毒血凝素Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MMP-1 基质金属蛋白酶-1 规格 0.1ml

PKB(Human protein kinase B) ELISA Kit 人蛋白激酶B 96T

phospho-RGS19(Ser151) 英文名称： 磷酸化G蛋白信号转导调节因子19 0.1ml