PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

燕麦镰孢SCFR/c-Kit (Stem Cell Factor Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Fusarium avenaceum

草酸青霉CSF3/GCSF (Granulocyte Colony Stimulating Factor 3) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium oxalicum

嗜热链球菌BNP (Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Streptococcus  thermophilus

苏云金芽孢杆菌UCRP (Ubiquitin Cross Reactive Protein) ELISA Kit用途: 害虫生物防治

耐冷冷杆菌GRα (Glucocorticoid Receptor Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Cryobacterium  psychrotolerans

大马勃C8b (Complement Component 8b) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

巨型艾美耳球虫PHSA (Poly Serium Antigen) ELISA Kit拉丁属名: maxima

玫瑰单胞菌AR (Androgen Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Roseomonas thermophilum sp. nov.

镰刀菌（大豆根腐病菌）RANκL (Receptor Activator of  Nuclear Factor Kappa B Ligand) ELISA Kit用途: 大豆根腐病的防治研究

蛹虫草TSA (Thyroid Stimulating Antibody) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

乳杆菌属TPP (Thrombus Precursor Protein) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  sp.

pAAV-RC5CASP12 (Caspase 12) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

猪链球菌OBTF1 (Octamer Binding Transcription Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: suis

布鲁氏菌CCSA-2 (Colon Cancer Specific Antigen-2) ELISA Kit拉丁属名: abortus

产酸克雷伯氏菌TSPAN30 (Tetraspanin 30) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
沙门氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒 Anti-Bim 细胞死亡调解子Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Dishevelled 2 英文名称： 蓬乱蛋白2 0.2ml

水通道蛋白-5 Anti-AQP5 0.1ml

Anti-CEA/Gold 胶体金离子标记鼠抗人癌胚抗原单克隆(检测)IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-ELk1(Ser383) 磷酸化细胞转录因子ELK1 规格 0.1ml

E2F6 转录因子E2F-6抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人类似RIKEN cDNA 3110050K21 基因 ELISA试剂盒英文名称：human similar to RIKEN cDNA 3110050K21 gene ELISA Kit进口/分装

CASKIN2 英文名称： 皮肤相互作用蛋白2 0.1ml

Anti-KCNA7 钾电压阀门通道混合器相关亚家族成员7Multi-class antibodies规格： 0.2ml

LTB(Human heat-labile enterotoxin B subunit) ELISA Kit 人不耐热肠毒素B亚单位Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-JNK1/3 氨基末端激酶1/3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh LCE2B 晚期包膜蛋白2B 规格 0.2ml

DHT(Human Dihydrotestosterone) ELISA Kit 人双氢睾酮 96T

PSMD6 英文名称： 蛋白酶调解因子10 0.2ml

人碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA试剂盒英文名称：Human basic fibroblast growth factor 4,bFGF-4 ELISA Kit 特价促销

Integrin Beta5 整合素β5抗原Multi-class antibodies规格： 0.5ml

Anti-Adiponectin Receptor 1 脂联素受体-1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-cdc25A (Ser178) 磷酸化细胞分裂周期蛋白25 规格 0.1ml

甲基绿染色液-绿色 12ml 配合DAB,New Fuchsin，Fuchsin使用

VAT 英文名称： 囊泡乙酰胆碱通道 0.1ml

DUSP5 英文名称： 双特异性蛋白磷酸酶5 0.2ml

CKS1 英文名称： 细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1 0.2ml

Anti-CXCR5/CD185 细胞表面趋化因子受体5Multi-class antibodies规格： 0.1ml

PR3 Ab-IgG(Human Anti-proteinase 3 antibody IgG) ELISA Kit 人抗蛋白酶3IgGMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-Insulin Receptor Beta 胰岛素受体βMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Livin 凋亡抑制蛋白 规格 0.1ml

CH(Human cholesterol) ELISA Kit 人血清总胆固醇 96T

RAG2 英文名称： 重组激活基因2蛋白 0.2ml