PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

根串珠霉ALDOC (Aldolase C, Fructose Bisphosphate) ELISA Kit拉丁属名: Thielaviopsis paradoxa

樟疫霉FGF9 (Fibroblast Growth Factor 9) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希氏杆菌USP8 (Ubiquitin Specific Peptidase 8) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

芽孢杆菌VCAM-1/CD106  (soluble Vascuolar Cell Adhesion Molecule 1) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus sp.

肠膜明串珠菌肠膜亚种MYH1 (Myosin Heavy Chain 1, Skeletal Muscle, Adult) ELISA Kit拉丁属名: Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides

桑格利娜氏链霉菌PC/CPG (Choline Phosphoglyceride) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces sanglieri

假单胞菌Ntn4 (Netrin 4) ELISA Kit用途: 成膜菌，在实验室SBR反应器中能够成膜或辅助成膜

Sphingomonas fauciumPT (Prothrombin) ELISA Kit拉丁属名: Sphingomonas faucium

韩国戴氏菌FABP8 (Fatty Acid Binding Protein 8, Myelin) ELISA Kit拉丁属名: Dyella koreensis

金针菇F2211FABP4 (Fatty Acid-binding Protein 4, Adipocyte) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

胞外多聚物鞘氨单胞菌OTF2A (Octamer Transcription Factor 2A) ELISA Kit拉丁属名: Sphingomonas sanxanigenens

赛维瓦尔假单胞菌pIκBα (Phospho-Inhibitory Subunit Of NF Kappa B Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas  thivervalensis

红缘层孔菌CX43 (Connexin 43) ELISA Kit 用途: 药用

根瘤菌IL-23 (Interleukin 23) ELISA Kit用途: 固氮

Microbacterium marinilacusSYCN (Syncollin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
羊沙门氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Beta tubulin cofactor D 英文名称： 微管蛋白β辅助因子D 0.2ml

Anti-Synapsin II 神经突触素2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Human recombination activating gene 1,RAG-1 ELISA Kit 人重组激活基因1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-SLC44A1/CD92 溶质转运蛋白家族44成员1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-rabbit IgG/Gold 胶体金标记的羊抗兔IgG 规格 0.5ml

P-CK(Human pan-cytokeratin) ELISA Kit 人广谱细胞角蛋白 96T

NEDD1 英文名称： 神经前体细胞表达蛋白1 0.2ml

CART 英文名称： 卡因和调节转录蛋白 0.2ml

Anti-EF1 Alpha 延伸因子EF-1aMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Anti-AT1R/AGTR1/FITC 荧光素标记紧张素Ⅱ-1型受体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Cripto-1(N-Terminus) 衍化生长因子抗原(表皮生长因子相关肽)N端Multi-class antibodies规格： 0.5mg

禽脑脊髓炎病毒 Anti-AEV 0.1ml

zinc finger protein 830 英文名称： 锌指蛋白830 0.2ml

phospho-DNA PKcs (Thr2609) 英文名称： 磷酸化DNA依赖性蛋白激酶 0.1ml

Anti-COX-2 细胞色素c氧化酶Multi-class antibodies规格： 0.2ml

DAP1 英文名称： 死亡相关蛋白1 0.2ml

Artemin Anti-ART 0.1ml

Anti-CD8/PE 荧光素藻红蛋白标记兔抗人、大、小鼠CD8IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-EIF4EBP1(Ser111) 磷酸化eIF4E结合蛋白 规格 0.1ml

EGF(Epidermal growth factor)rat 重组表皮生长因子抗原(大鼠)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人细胞癌抗原2(SCCAg-2)ELISA试剂盒英文名称：Human Squamous Cell Carcinoma Antigen 2,SCCAg 2 ELISA Kit进口/分装

CKLFH5 英文名称： 趋化素样因子超家族成员5 0.2ml

Anti-phospho-P53 (Ser15) 磷酸化抑制基因P53Multi-class antibodies规格： 0.1ml

DHEA(Human Dehydroepiandrosterone) ELISA Kit 人脱氢表雄酮Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-LKB1(Ser428) 磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh KLHL31 Kelch样蛋白31 规格 0.2ml

TI(Human true insulin) ELISA Kit 人真胰岛素 96T

PSA(Pa3) 英文名称： 人特异性抗原单克隆(包被) 0.1ml