PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

链霉菌PDGFA (Platelet Derived Growth Factor Subunit A ) ELISA Kit 用途: 代谢产物具有抗菌活性。

烟色离褶伞MCSP (Melanoma Associated Chondroitin Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

白被黑蛋巢PP13 (Placental Protein13) ELISA Kit拉丁属名: Cyathus pallidus

芽孢杆菌TNF-α (Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus atrophaeus

柯氏黑蛋巢IgE (Immunoglobulin E) ELISA Kit拉丁属名: Cyathus colensoi

棒曲霉SGK2 (Serum/Glucocorticoid Regulated Kinase 2) ELISA Kit用途: 产青霉素

大肠埃希菌NFRκB (Nuclear Factor Related To Kappa B Binding Protein) ELISA Kit拉丁属名: coli

尖孢镰刀菌GKRP (Glucokinase Regulatory Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母EG-VEGF/PK1 (Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor)ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

pBBRMCS-2iPLA2 (Phospholipidase A2, Calcium Independent) ELISA Kit规格: 1ml甘油管1支，20ul质粒，一般次日下午

动物双歧杆菌IL-2 (Interleukin 2) ELISA Kit拉丁属名: Bifidobacterium  animalis

华美链霉菌GP (Anti-Glycoprotein Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces  splendens

芽孢杆菌MIgD (Membrane IgD) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus sp.

立枯丝核菌（测序正确）IL-4 (Interleukin 4) ELISA Kit拉丁属名: Rhizoctonia solani

绒毛栓菌PRSS8 (Protease, Serine 8) ELISA Kit 拉丁属名: Trametes pubescens
鼻鸟杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 人紧张素Ⅱ受体1(ANGⅡR-1)ELISA试剂盒英文名称：Human angiotension Ⅱ receptor 1,ANGⅡR-1 ELISA Kit特价供应

人紧张素Ⅱ受体1(ATⅡR1)ELISA试剂盒 英文名称：Human angiotension Ⅱ receptor 1 Antibody,ATⅡR1 Ab ELISA Kit 进口/原装

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人紧张素Ⅱ受体2(AT2R-Ab)ELISA试剂盒 英文名称：Human Angiotensin Ⅱ Receptor 2 antibody,AT2R-Ab ELISA Kit进口/分装

YKL-40/CGP-39 human 软骨糖蛋白39(人)Multi-class antibodies规格： 96T

Anti-Phospho-DBC1 (Thr454) 磷酸化缺失基因1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Netrin 4 轴突生长诱向因子4 规格 0.1ml

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Anti-TREML2/TLT2/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠髓系细胞触发受体样转录因子2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-IRF7 (Ser471/472) 磷酸化干扰素调节因子7 规格 0.1ml

Socs 1 (suppressor of cytokine signaling 1) 细胞激酶信号-1抑制剂(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

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人2，3-二磷酸甘油酸(2，3-DPG)ELISA试剂盒英文名称：Human 2，3-Disphosphoglycerate，2，3-DPG ELISA Kit特价供应

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Cezanne 英文名称： Cezanne蛋白 0.1ml

Anti-HER2 receptor HER2受体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Human Coronaviruses IgG ELISA kit 人毒Multi-class antibodies规格： 48T

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Rhesus antibody Rh LCEAH/ECHS1 长链烯脂酰辅酶A水化酶 规格 0.1ml

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RNF3 英文名称： 环指蛋白3 0.2ml