PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

梭形凸脐蠕孢PKIα (Protein Kinase Inhibitor Alpha) ELISA Kit 用途: 研究

炭黑曲霉C3 (Complement Component 3) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  carbonarius

粉肉拟层孔菌Ep-CAM/CD326 (Epithelial Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大洋枝芽孢杆菌ANG1 (Angiopoietin 1) ELISA Kit拉丁属名: Virgibacillus oceani

枯草芽孢杆菌F10 (Coagulation Factor X) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

尖孢镰孢TPA (Tissue Polypeptide Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Fusarium oxysporum

茶轮斑盘多毛孢菌Alk-Smase (Alkaline Sphingomyelinase) ELISA Kit用途: 植物病原物，为该病防治提供依据

微球菌ANGPTL1 (Angiopoietin Like Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Micrococcus sp.

柞蚕链球菌DDC (Dopamine Decarboxylase) ELISA Kit拉丁属名: Streptococcus pernyi

酿酒酵母MRC1 (Mannose Receptor C Type 1 Like Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

泡囊短波单胞菌CMLC-1 (Cardiac Myosin Light Chains 1) ELISA Kit用途: 分类、研究，具有用作耐重金属基因资源潜力。

Enterobacter cloacae subsp. dissolvensC4 (Complement Component 4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

LMP7/PSMB9 (Low Molecular-weight Protein/proteasome Beta-type Subunit) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

哈茨木霉GSTpi (Glutathione S Transferases Pi) ELISA Kit拉丁属名: Trichoderma  harzianum

灰黄青霉fT4 (Free Thyroxine) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium griseofulvum
葡萄状穗霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书DUOXA1 英文名称： 双氧化酶成熟因子 0.2ml

Anti-phospho-AMPK beta 1(Ser108) 磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

E2F6 英文名称： 转录因子E2F6 0.1ml

上皮生长因子样域酪氨酸激酶2 anti-Tie2 0.2ml

Anti-Tn-C/FITC 荧光素标记腱糖蛋白-CIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-KLF5(Ser311) 磷酸化肠道内富含的Kruppel样因子5 规格 0.1ml

PACAP/VIP receptor 腺苷酸环化酶激活肽/活性肠肽受体(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

CCAP 英文名称： 心动加速蛋白多肽 0.2ml

Anti-Integrin Alpha 3 + Beta 1 整合素α3β1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

BB-Ab(Human anti-B burgdorleri antibody) ELISA Kit 人抗BBMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-IL-27R/TCCR 白细胞介素27受体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh LTBP4 转化生长因子β结合蛋白4 规格 0.2ml

BSP(Human bone sialoprotein) ELISA Kit 人骨涎蛋白 96T

RAB5 英文名称： ras癌基因家族Rab5蛋白 0.1ml

人类似RIKEN cDNA 2010109K09 基因 ELISA试剂盒英文名称：human similar to RIKEN cDNA 2010109K09 gene ELISA Kit特价促销

SIP1 peptide 运动神经元存活蛋白结合蛋白1抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Bim 细胞死亡调解子Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PGGT1A/FNTA 蛋白香叶烯基转移酶1α 规格 0.2ml

Flt-1/VEGFR1 浓缩液 0.1ml 进口分装

Urocortin 3 英文名称： 尿皮质素UCN3 0.1ml

CCL24 英文名称： 嗜酸粒细胞趋化蛋白24 0.2ml

CLSTN2 英文名称： 相关类钙粘蛋白CS2 0.2ml

Anti-phospho-IRS1(Ser789) 磷酸化受体底物-1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Lep IgG(Human Leptospira IgG) ELISA Kit 人钩端螺旋体IgGMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-KCNA7 钾电压阀门通道混合器相关亚家族成员7Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Layilin 透明质酸受体 规格 0.1ml

SS(Human Somatostatin) ELISA Kit 人生长抑素 96T

PSMD6 英文名称： 蛋白酶调解因子6 0.2ml