PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

米根霉CD4 (Cluster of Differentiation 4) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus oryzae

小单孢菌FHA (Filamentous Hemagglutinin) ELISA Kit用途: 代谢产物具有抗菌活性。

球毛壳PGR (Progesterone Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Chaetomium globosum

酿酒酵母CCL4L1 (Chemokine C-C-Motif Ligand 4 Like Protein 1) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

猪链球菌Methylase ELISA Kit拉丁属名: suis

杨树细盾霉(都不提供)SFRP2 (Secreted Frizzled Related Protein 2) ELISA Kit用途: 植物病原物，用于该菌种群遗传学研究

Clostridium sp.GNLY (Granulysin) ELISA Kit拉丁属名: Clostridium sp.

雅致小克银汉霉PLSCR1 (Phospholipid Scramblase 1) ELISA Kit拉丁属名: Cunninghamella elegans

污白干酪菌Grb7 (Growth Factor Receptor Bound Protein 7) ELISA Kit 拉丁属名: Tyromyces amygdalinus

毛霉状卷霉IL-10 (Interleukin-10) ELISA Kit

拉丁属名: Circinella mucoroides

大肠埃希氏菌PCI (Procollagen I) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

松杉灵芝VEGF-B (Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) ELISA Kit 拉丁属名: Ganoderma tsugae

Penicillium RPL26 (Ribosomal Protein L26) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

异常汉逊酵母异常变种PCDHγA2 (Protocadherin Gamma A2) ELISA Kit 拉丁属名: Hansenula  anomala var. anomala

链霉菌属FOXO1 (Forkhead Box Protein O1) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces hyderabadensis
猴病毒40探针法荧光定量PCR试剂盒 Complement C4 / C4a 英文名称： 过敏毒素C4/补体C4 0.1ml

Anti-Phospho-CD18 (Ser756/Thr758/759) 磷酸化整合素β2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

HSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta) 热休克蛋白-90β (抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CD229/SLAMF3 CD229Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PANK4 泛酸激酶4 规格 0.2ml

ERBB3 Kit Human 人 HER3 / ErbB3 ELISA配对 ELISA

TNFSF18 英文名称： 坏死因子配体超家族成员18 0.1ml

CBLN3 英文名称： 小脑肽3 0.2ml

Anti-LEF-1 淋巴增强因子-1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

GOD(Human glucose oxidase) ELISA Kit 人葡萄糖氧化酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NF-H 高分子量神经丝蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IL-1R2 /CD121b/IL1 Receptor II 白介素1受体2 规格 0.2ml

ALG(Human anti-lymphocyte globulin) ELISA Kit 人抗淋巴细胞球蛋白 96T

Phospho-PLC gamma 2(Tyr753) 英文名称： 磷酸化磷酯酶Cγ2 0.1ml

人毒性休克综合征毒素1(TSST-1)ELISA试剂盒 英文名称：Human toxic shock syndrome toxin,TSST-1 ELISA Kit进口/原装

人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)ELISA试剂盒 英文名称：Human muscarinic acetylcholine receptor,M-AChR ELISA Kit特价供应

人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)ELISA试剂盒英文名称：Human muscarinic acetylcholine receptor M3,M-AChR M3 ELISA Kit 特价促销

Notch1/MOTC(Neurogenic locus notch homolog protein 1) 跨膜受体蛋白Notch-1抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-AQP3 水通道蛋白-3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ATG4D(Ser467) 磷酸化自噬相关蛋白4D 规格 0.1ml

山羊抗人 IgG(H+L)/HRP 0.1ml 美国Jackson公司分装

CLNS1A 英文名称： 氯离子通道调节蛋白1A 0.2ml

Anti-Integrin beta 7 整合素β7Multi-class antibodies规格： 0.1ml

SLC/CCL21(Human secondary lymphoid-tissue chemokine) ELISA Kit 人二级淋巴组织趋化因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-GTP cyclohydrolase 1/GTP-CH-1 三磷酸鸟苷环水解酶Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MMP19 基质金属蛋白酶18/19 规格 0.2ml

MMP-5(Human matrix metalloproteinase 5) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶5 96T

Reelin 英文名称： 络丝蛋白 0.1ml