PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

枯草芽孢杆菌GSK3β (Glycogen Synthase Kinase 3 Beta) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

酿酒酵母Gas6 (Growth Arrest Specific Protein 6) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

匍匐曲霉COL7 (Collagen Type VII) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus repens

日本玉蕈IL-1R2 (Interleukin 1 Receptor Type II) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯斑拟盘多毛孢FGα (Fibrinogen Alpha) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

侧柄褐孔菌TECK/CCL25 (Thymus Expressed Chemokine) ELISA Kit 拉丁属名: Fuscoporia discipes

桃红平菇PKB (Protein Kinase B) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌UCHL1 (Ubiquitin Carboxyl Terminal Hydrolase L1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

莫哈韦芽孢杆菌LIFR (Leukemia Inhibitory Factor Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus mojavensis

酿酒酵母ANGPTL4 (Angiopoietin Like Protein 4) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

水丛毛单胞菌VMA (Vanillylmandelic Acid) ELISA Kit拉丁属名: Comamonas aquatica

茯苓KIM-1 (Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit拉丁属名: Wolfiporia  extensa

白浅灰链霉菌C4BP (C4 Binding Protein) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

壳菌MUC4 (Mucin 4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

乳酸乳球菌乳亚种TIMP-2 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit拉丁属名: Lactococcus  lactis subsp.lactis
小蛇菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒供应商小鼠抗心磷脂IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒英文名称：Mouse anti-cardiolipin antibody IgM,ACA-IgM ELISA Kit特价促销

小鼠抗血小板IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse platelet antibodies IgG/M/A,PA-IgG/M/A ELISA Kit特价促销

OAT4L又称URAT1 (Urate Transporter 1) 尿酸盐重吸收转运子1 (抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CD328/Siglec-7 唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素7Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh ORAV1 高表达的蛋白1 规格 0.2ml

CIB2 Kit Human 人 CIB2 ELISA配对 ELISA

TRIP 英文名称： 坏死因子受体相互作用蛋白 0.1ml

Cathepsin L 英文名称： 组织蛋白酶L 0.1ml

Anti-DP-II 桥粒斑蛋白2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

mouse Caspase-6 小鼠Caspase-6Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-FLT-3/CD135 FMS样酪氨酸激酶3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rabbit IgG/PE-CY5 PE-CY5标记的小鼠抗兔IgG 规格 0.1ml

Beta-Nph(Human Beta-naphthol) ELISA Kit 人β酚 96T

phospho-Smad3 (Ser423) 英文名称： 磷酸化细胞信号转导分子SMAD3 0.1ml

ADAM17 英文名称： 坏死因子α转换酶 0.1ml

Anti-CD226/DNAM-1/FITC 荧光素标记CD226IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

sE-selectin ELISA Kit 大鼠可溶性E选择素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Aggrecan/FITC 荧光素标记软骨蛋白聚糖/可聚蛋白多糖IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FBXO33 F-box蛋白相关蛋白33 规格 0.2ml

HBsAb(Mouse hepatitis B virus surface antibody) ELISA Kit 小鼠表面 96T

MLF1 Interacting Protein 英文名称： 卡波西氏病毒潜伏核抗原相互作用蛋白1 0.1ml

CLIP2 英文名称： 细胞质连接蛋白2 0.2ml

Anti-phospho-IRS1(Ser1101) 磷酸化受体底物-1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Gzms-B(Human granzymes B) ELISA Kit 人颗粒酶BMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-NSBP1 核小体结合蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IFN-Beta 干扰素β 规格 0.1ml

CCP(Human anti-cyclic citrullinated peptide) ELISA Kit 人抗环胍酸肽 96T

pan methyl Lysine 英文名称： 泛甲基赖酸 0.2ml