PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

Corynebacterium variabileF-Box Protein 2(FBXO2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

破梭菌CCSA-4 (Colon Cancer Specific Antigen-4) ELISA Kit拉丁属名: tetani

变灰青霉BLVRB (Biliverdin Reductase B) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium canescens

贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型LSP (Liver Specific Lipoprotein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

泡盛曲霉TUBβ (β-Tubulin) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  awamori

Bacteroides doreiEAR3 (Eosinophil Associated Ribonuclease A family Member 3) ELISA Kit拉丁属名: Bacteroides dorei

杏鲍菇PTF1α (Pancreas Specific Transcription Factor 1α) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

热吸水链霉菌锈赤亚种SF1 (Steroidogenic Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces thermohygroscopicus subsp. rubiginosus

嗜冷咸海鲜球菌SDC3 (Syndecan 3) ELISA Kit 拉丁属名: Jeotgalicoccus  psychrophilus

渭香1号DPD (Deoxypyridinoline) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌AQP-4 (Aquaporin 4) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis

木贼镰孢菌PAI-1 (Plasminogen Activator Inhibitor-1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希菌Tn-T (Troponin T) ELISA Kit拉丁属名: coli

枯草芽胞杆菌枯草亚种PLG (Plasminogen) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

锰氧化褐黄海水菌DβH (Dopamine-β-Hydroxylase) ELISA Kit拉丁属名: Fulvimarina manganoxydans
梭形血吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒规格人单纯病毒Ⅰ型(HSVⅠAb)ELISA试剂盒英文名称：Human Herpes simplexvirusⅠantibody,HSVⅠAb ELISA Kit进口/原装

MLN(Motilin)peptide 胃动素多肽Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Annexin VI 膜粘连蛋白 VIMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-Bcl 10(Ser218) 磷酸化Bcl-10 规格 0.1ml

兔抗人 C3c/FITC 0.2ml 绿色荧光，Dako公司

Villin 英文名称： 绒毛蛋白 0.2ml

DDX4 英文名称： DDX4 0.1ml

Cathepsin H 英文名称： 组织蛋白酶H 0.1ml

Anti-IGF1R/CD221 样生长因子1受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

IL-9(Human Interleukin 9) ELISA KIT 人白介素9Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-GZMA 颗粒酶AMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Bov IgG/Bio 生物素标记的小鼠抗IgG 规格 0.1ml

ANX- V (Human Annexin V ) ELISA Kit 人膜联蛋白Ⅴ 96T

Repulsive Guidance Molecule B 英文名称： 反义导向分子RGMB 0.2ml

phospho-MCSF Receptor(Tyr923) 英文名称： 磷酸化巨噬细胞集落刺激因子受体 0.1ml

Anti-phospho-B-Raf (Ser365) 磷酸化B-RafMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Adrenomedullin Human 人肾上腺髓质素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CYP11A1/P450SCC 细胞色素P450 11A1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NFAT4 核因子活化T细胞胞浆蛋白3 规格 0.2ml

human Mus musculus similar to 60S ribosomal protein L12,LOC382344 ELISA kit 人类似60S核糖体蛋白L21 96T

TNIP2 英文名称： 坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白2 0.2ml

CLIC6 英文名称： 氯离子通道蛋白6 0.2ml

Anti-LAIR-1/CD305 白细胞相关免疫球蛋白样受体1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

irGH(Human Immunoreactive growth hormone) ELISA Kit 人免疫反应性生长激素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-LDH 乳酸脱氢酶Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh KMT8/Riz1/Riz2 转录因子GATA3结合蛋白G3B 规格 0.2ml

ADM(Human adrenomedullin) ELISA Kit 人肾上腺髓质素 96T

Phospho-PNK1 (Ser114 + Thr118) 英文名称： 磷酸化多聚合苷酸激酶3磷酸化酶 0.1ml