PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

新疆糖丝菌NTXI (Cross Linked N-telopeptide of Type I Collagen) ELISA Kit拉丁属名: Saccharothrix xinjiangensis

海绵假单胞菌FN (Fibronectin) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  pachastrellae

鞘氨菌属HSP-27/HSPB1 (Heat Shock Protein 27) ELISA Kit拉丁属名: Sphingobium   aromaticiconvertens

乔治亚青霉PDK4 (Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 4) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium georgiense

强雄腐霉PROC (Protein C) ELISA Kit拉丁属名: Pythium arrhenomanes

大弯杆菌NRIP1 (Nuclear Receptor Interacting Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Flectobacillus major

粉红聚端孢VEGF-D (Vascular Endothelial Growth Factor D) ELISA Kit 拉丁属名: Trichothecium roseum

大肠埃希氏菌(大肠杆菌)PTGES2 (Prostaglandin E Synthase 2) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia coli

产黄青霉UGT2B4 (Uridine Dipho-sphate Glucuronosyltransferase 2 Family Polypeptide B4) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium chrysogenum

Erythrobacter pelagi MIP-3β/ELC/CCL19 (Macrophage Inflammatory Protein 3β) ELISA Kit 拉丁属名: Erythrobacter pelagi

季也蒙假丝酵母EPP (Erythrocyte Protoporphyrin) ELISA Kit拉丁属名: Candida guilliermondii

橄榄色青霉PRI (Placental Ribonuclease Inhibitor) ELISA Kit用途: 饲料用酶的筛选

南方树舌GH2 (Growth Hormone 2) ELISA Kit 拉丁属名: Ganoderma australe (Fr.) Pat

酿酒酵母VTN (Vitronectin) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

红淡紫灰链霉菌GATA4 (GATA Binding Protein 4) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces  rubrolavendulae
柯拉松血吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒供应商CD63/MLA1 溶酶体膜糖蛋白抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Bag1/RAP46 抑凋亡基因bag1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-A Raf(Ser299) 磷酸化A-Raf 规格 0.1ml

Ki67 浓缩液 0.1ml 进口分装

UBE2J2 英文名称： 泛素蛋白连接酶J2 0.2ml

CHST12 英文名称： 碳水化合物磺基转移酶12 0.1ml

Anti-Bag1/RAP46 抑凋亡基因bag1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Catalase 英文名称： 酶 0.1ml

Anti-phospho-PKC beta 1/2(Thr500) 磷酸化蛋白激酶C β1/β2(Thr500)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

EPOR(Human Erythropoietin receptor) ELISA Kit 人红细胞生成素受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-MARCO 巨噬细胞清道夫受体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh KIAA1522 KIAA1522蛋白 规格 0.2ml

Cortisol ELISA Kit 大鼠皮质醇 96T

PPAR gamma 2 英文名称： 过氧化酶活化增生受体γ2 0.2ml

Anti-TIEG1/KLF10/FITC 荧光素标记TGF-β诱导早期应答基因1IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Ser400) 磷酸化原活化蛋白激酶激酶8 规格 0.1ml

AVPR2(arginine vasopressin receptor 2) 精氨酸加压素受体2抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒英文名称：Rat high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit进口/分装

大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒英文名称：Rat Super Oxidase Dimutase,SOD ELISA Kit特价促销

大鼠成纤维细胞生长因子10(FGF-10)ELISA试剂盒英文名称：Rat fibroblast growth factor-10,FGF-10 ELISA Kit进口/原装

大鼠迟现抗原(VLA)ELISA试剂盒英文名称：Rat very late appearing antigen,VLA ELISA Kit进口/原装

CLDND2 英文名称： 膜蛋白CLDND2 0.2ml

Anti-FPRL1 脂氧素受体1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

UPAR 大鼠凝血酶受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-EGF 表皮生长因子Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MYL9 肌球蛋白轻链9 规格 0.1ml

C4d(Human Complement fragment 4d) ELISA Kit 人补体片断4d 96T

SOX17 英文名称： 转录因子SOX17 0.1ml