PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

酿酒酵母EL (EuglobulinLysis) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

缺陷短波单胞菌AMBP (Alpha-1-Microglobulin/Bikunin Precursor) ELISA Kit拉丁属名: Brevundimonas diminuta

球毛壳菌CRYαB (Crystallin Alpha B)  ELISA Kit 拉丁属名: Chaetomium globosum Kunze

肉色诺卡氏菌 PSAP (Prosaposin) ELISA Kit 拉丁属名: Nocardia carnea

大奇异球菌IL-5 (Interleukin 5) ELISA Kit拉丁属名: Deinococcus grandis

枯草芽孢杆菌SELE (E-Selectin) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

双孢镰孢PADI4 (Peptidyl Arginine Deiminase Type IV) ELISA Kit拉丁属名: Fusarium dimerum

林肯链霉菌TCGF-Ⅲ (Tcell Growth Factor Ⅲ) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces lincolnensis

毛头鬼伞IP-10/CXCL10 (Interferon Gamma Induced Protein 10kDa) ELISA Kit拉丁属名: Coprinus comatus

牛奶  三聚胺FADS2 (Fatty Acid Desaturase 2) ELISA Kit拉丁属名: 牛奶  三聚胺

新城疫病毒IL-20 (Interleukin 20) ELISA Kit拉丁属名: Newcastle       disease virus

地下诺尔氏菌GLUT2 (Glucose Transporter 2) ELISA Kit拉丁属名: Knoellia  subterranea

戊糖乳杆菌PKIβ (Protein Kinase Inhibitor Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus  pentosus

根瘤菌BF (Factor B) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

人参地土地杆菌SUMO2 (Small Ubiquitin Related Modifier 2) ELISA Kit拉丁属名: Pedobacter  panaciterrae
米黑根毛霉探针法荧光定量PCR试剂盒规格VEGF-B 英文名称： 内皮生长因子B 0.1ml

DUOX2 英文名称： 双氧化酶2/甲状腺氧化酶2 0.2ml

Anti-phospho-AMPK beta 1(Ser182) 磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Ecm2 英文名称： 细胞外基质蛋白2 0.1ml

神经纤毛蛋白-1 Anti-NRP-1 0.1ml

Anti-Slit2/Slil3/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠神经迁移蛋白Slit2/3IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-p107(Thr369) 磷酸化视网膜母细胞瘤样蛋白p107 规格 0.1ml

Carboxypeptidase H 英文名称： 胰羧肽酶E 0.2ml

Anti-GP65/SDFR1/NPTN 间质细胞衍化因子受体1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

CK-18(Human cytokeratin 18) ELISA Kit 人细胞角蛋白18Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-HDAC1/HD1 组蛋白去乙酰化酶1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Menin/Men1 Menin蛋白 规格 0.2ml

PON(Human paraoxonase) ELISA Kit 人对氧磷酶 96T

RBBP5 英文名称： 视网膜母细胞瘤结合蛋白5 0.2ml

DAZ4 英文名称： 缺失基因4 0.1ml

Anti-APC/Adenomatous Polyposis Coli 腺瘤样Multi-class antibodies规格： 0.1ml

eIF3F 英文名称： 真核翻译起始因子3F 0.1ml

内皮细胞生长因子受体-3 Anti-VEGFR-3 0.1ml

Anti-TSARG6/FITC 荧光素标记生精细胞凋亡相关基因6IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-IKKi/IKKe(Ser172) 磷酸化核因子NFκB抑制蛋白激酶i 规格 0.1ml

TGF- Beta2 (Ttansforming Growth Factor – Beta2) 转移生长因子–β2(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

CK6 英文名称： 细胞角蛋白6 0.1ml

Anti-phospho-IKK alpha (Tyr463) 磷酸化KB抑制蛋白激酶αMulti-class antibodies规格： 0.1ml

C.albicans(Human Candida Albicans) ELISA Kit 人白色念珠菌Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Jak3 蛋白酪氨酸激酶JAK-3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh L-Citrulline L-瓜氨酸 规格 0.2mg

uE3(Human ultra Estriol) ELISA KIT 人超敏游离雌三醇 96T

RHOBTB1 英文名称： Rho相关结构域BTB蛋白质1 0.2ml