PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

枯斑拟盘多毛孢EXT1 (Exostoses 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

木耳属VIPR1 (Vasoactive Intestinal Peptide Receptor) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

北京诺卡氏菌CD99 (Cluster of Differentiation 99) ELISA Kit 拉丁属名: Nocardia beijingensis

根瘤菌ARRβ2 (Arrestin Beta 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

两歧双歧杆菌DPP10 (Dipeptidyl Peptidase X) ELISA Kit拉丁属名: Bifidobacterium  bifidum

杀鲑气单胞菌Smad4/MADH4 (Mothers Against Decapentaplegic Homolog 4 )ELISA Kit拉丁属名: Aeromonas  salmonicida

麦根腐平脐蠕孢CFH (Complement Factor H) ELISA Kit用途: 教学科研

紫黑杜擀氏菌TWEAK (Tumour Necrosis Factor Related Weak Inducer of Apoptosis) ELISA Kit拉丁属名: Duganella violaceinigra

产二素链霉菌PLP1 (Proteolipid Protein 1, Myelin) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces ambofaciens

酿酒酵母CaSR (Calcium Sensing Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

橙灰紧旋链霉菌AChRab (Acetylcholine Receptor Antibody) ELISA Kit 用途: 分类 研究

鸭疫里氏杆菌ERN1 (Endoplasmic Reticulum to Nucleus Signalling 1) ELISA Kit拉丁属名: anatipestifer

紫色红曲TTR (Transthyretin) ELISA Kit 拉丁属名: Monascus  purpureus

粪产碱菌CSF (Colony Stimulating Factor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

白地霉AP62A (Anti-P62 Antibody)  ELISA Kit 拉丁属名: Geotrichum candidum Link
兔粘液瘤病毒探针法荧光定量PCR试剂盒规格人游离原卟啉(FEP)ELISA试剂盒 英文名称：Human Free erythrocyte proloporphyrin,FEP ELISA Kit特价供应

人游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒英文名称：Human free fatty acids，FFA ELISA Kit 进口/分装

人诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA试剂盒英文名称：Human inducible nitric oxide synthase，iNOS ELISA Kit 特价供应

CD25/IL-2RA(Imterleukm-2 Receptor alpha) CD25/白介素2-受体(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CCK8 胆囊收缩素Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh PCDHB11 原钙粘蛋白β11 规格 0.2ml

TNFRSF1A Kit Human 人 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A ELISA配对 ELISA

CAPG2 英文名称： 染色体相关蛋白2 0.2ml

Anti-Morphine *单克隆Multi-class antibodies规格： 0.2ml

SCF/MGF(Mouse Stem cell factor/mast cell growth factor) ELISA kit 小鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CD10/CALLA/FITC 荧光素标记CD10IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh E2F5 转录因子E2F-5 规格 0.1ml

PIV IgM 付病毒 IgM(间接法二步法)

PKM2 英文名称： 小鼠抗酸激酶-M2 0.1ml

Anti-AGEs 晚期糖基化终末产物Multi-class antibodies规格： 0.1ml

protein 4.2 英文名称： 红细胞膜蛋白4.2 0.2ml

轴索过度生长抑制因子-A Anti-Nogo-A 0.1ml

Anti-SIRT1/FITC 荧光素标记沉默调节蛋白1IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-P53(Thr55) 磷酸化抑制基因P53 规格 0.1ml

Bassoon(BSN) Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒英文名称：Human Macrophage Inflammatory Protein-3α,MIP-3α ELISA Kit 进口/原装

CK1+5+10+14 英文名称： 高分子量角蛋白 0.1ml

Anti-IL-17RD 白介素17受体DMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Human anti-PL7-antibody ELISA Kit 人PL7/抗苏氨酰tRNA合成酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-IL-17RC/IL-17RL 白介素17受体CMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh LY-96/MD-2 MD-2蛋白 规格 0.1ml

LRP-6(Human low-density lipoprotein-receptor-related protein) ELISA Kit 人受体相关蛋白6 96T

RAC1+RAC2 英文名称： GTP结合蛋白RAC1+RAC2 0.1ml