PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

大肠埃希菌αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit拉丁属名: coli

谷氨酸棒杆菌PRKG1 (Protein Kinase, cGMP Dependent Type I) ELISA Kit用途: 产赖氨酸菌株

链霉菌IGF-2 (Insulin Like Growth Factor 2) ELISA Kit 用途: 分类 研究

平脐儒孢菌F13 (Coagulation Factor ⅩⅢ) ELISA Kit用途: 研究

硬水黄杆菌δSIP-α (Delta Sleep Inducing Peptide α) ELISA Kit拉丁属名: Flavobacterium  aquidurense

卷曲链霉菌NRP1 (Neuropilin 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

胶孢STAT5A (Signal Transducer and Activator of Transcription 5A) ELISA Kit 拉丁属名: Colletotrichum gloeosporioides

SandarakinorhabdusBCDF (B-Cell Differentiation Factor)  ELISA Kit拉丁属名: Sandarakinorhabdus  sp.

毛木耳MASP (Mannan Binding Lectin Associated Serine Protease) ELISA Kit拉丁属名: Auricularia  polytricha

枯草芽孢杆菌HYOU1 (Hypoxia Up Regulated 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

马赛菌MLZE (Melanoma Derived Leucine Zipper Extra Nuclear Factor) ELISA Kit拉丁属名: Massilia namucuonensis

大肠埃希氏菌PDGF (Platelet-Derived Growth Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia  coli

CaN (Calcineurin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母CPR (Cytochrome P450 Reductase) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

塔宾曲霉CDKN3 (Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 3) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus tubingensis
雷氏普罗威登斯菌探针法荧光定量PCR试剂盒 AKT1 英文名称： 蛋白激酶B 0.1ml

Anti-Bax protein/FITC 荧光素标记 Bax 蛋白IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

F VIII -Ag(Mouse coagulation factor VIII related antigen) ELISA Kit 小鼠凝血因子Ⅷ相关抗原Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CD34/PE 荧光素PE标记CD34(细胞表面的唾液粘蛋白)IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh DUSP1/MKP1 原活化蛋白激酶磷酸酶-1 规格 0.1ml

COX IgG II 柯萨奇病毒 IgG Ⅱ(间接法二步法)

MKS1 英文名称： 梅克尔-格鲁伯综合征相关蛋白 0.2ml

Camk1g 英文名称： 钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶IG 0.1ml

Anti-NQO1 醌氧化还原酶Multi-class antibodies规格： 0.2ml

anti-RV IgM(Human anti-rubella virus IgM antibody,anti-RV IgM) ELISA Kit 人IgMMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-RKIP Raf激酶抑制蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HEATR7B2 热休克蛋白受体家族蛋白7B2 规格 0.2ml

eNOS-3(Human Alpha1-Acid glycoprotein) ELISA Kit 人内皮型一氧化氮合成酶3 96T

PALB2 英文名称： 癌易感基因相关蛋白2 0.1ml

CD155/PVR 英文名称： 病毒受体 0.1ml

Anti-Phospho-Dab1 (Ser491) 磷酸化Disabled 1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

IL-3 大鼠白介素-3Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-TNFRSF12A 坏死因子配体超家族成员12AMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NEK2 中心体相关蛋白激酶Nek2 规格 0.2ml

Human glycosylated serum protein,GSP ELISA Kit 人糖化蛋白 96T

TMEM59L 英文名称： 跨膜蛋白59样蛋白 0.2ml

CIDEB 英文名称： CIDEB 0.2ml

Anti-Nonylphenol 任基酚Multi-class antibodies规格： 0.2mg

26S PSM(Human 26S proteasome) ELISA Kit 人26S蛋白酶体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NPM 核仁磷酸蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IGSF5 免疫球蛋白超家族成员5 规格 0.2ml

TRH(Mouse thyrotropin-releasing hormone) ELISA Kit 小鼠促甲状腺素释放激素 96T

phospho-PIK3R1(Tyr467) 英文名称： 磷酸化磷脂酰肌醇激酶 0.1ml