PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

詹氏酸杆菌PACAP-38 (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 38) ELISA Kit拉丁属名: Propionibacterium  jensenii

非无菌药品  需氧菌总数 PACAP-27 (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 27) ELISA Kit拉丁属名: 非无菌药品  需氧菌总数

酿酒酵母NOS1/nNOS (Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

Maribius salinusIgA (Immumoglobulin A) ELISA Kit 拉丁属名: Maribius salinus

鸡伤寒沙门氏菌OC/BGP (Osteocalcin) ELISA Kit  拉丁属名: gallinarum

大肠埃希氏菌CTXI (Cross Linked C-telopeptide of Type I Collagen) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

酿酒酵母CTX-II (Cross Linked C-telopeptide of Type II Collagen) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

斯托克青霉CTX-III (Cross Linked C-telopeptide of Type III Collagen) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium stolkiae

双歧双歧杆菌拉丁属名: Bifidobacterium bifidum

梅氏弧菌IgY (Immunoglobulin Y) ELISA Kit拉丁属名: Vibrio metschnikovii

总状共头霉IgG (Immunoglobulin G) ELISA Kit拉丁属名: Syncephalastrum  racemosum

果生链核盘菌ORM1 (Orosomucoid 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

纤维単胞菌α-Glu (Alpah Glucosidase) ELISA Kit拉丁属名: Cellulomonas  sp.

阿姆斯特丹曲霉AmAC-1 (Alternative Macrophage Activation-associated CC Chemokine 1) ELISA Kit拉丁属名: Eurotium amsodami

腐皮镰孢AT-Ⅲ (Anti-Thrombin Ⅲ) ELISA Kit拉丁属名: Fusarium solani
丙酸杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格Anti-Synapsin I /FITC 荧光素标记神经突触素1IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-MKP1 (Ser296 + Ser318) 磷酸化原活化蛋白激酶磷酸酶-1 规格 0.1ml

HCV-NS4a 病毒-NS4a(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

大鼠可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒英文名称：Rat Soluble Intercellular Adhesion Molecule 1,sICAM-1 ELISA Kit 进口/分装

大鼠可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)酶联免疫分析大鼠可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)酶联免疫分析体(sEPCR)ELISA试剂盒英文名称：Rat soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA Kit特价供应

大鼠可溶性细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒英文名称：Rat soluble Vascuolar cell adhesion molecule 1,sVCAM-1 ELISA Kit进口/原装

大鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA试剂盒英文名称：Rat soluble platelet endothelial cell adhesion molecule 1,sPECAM-1 ELISA Kit特价供应

calf thymus DNA 英文名称： 小胸腺DNA 0.2ml

Anti-Dynamin 2 酶动力蛋白2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

IL-21 小鼠白介素-21Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-ERK1(Thr202/Thr204)+ERK2(Thr183/Tyr185) 磷酸化原活化蛋白激酶1/2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MTF-1 金属应答元件结合转录因子-1 规格 0.2ml

PC(Human plasma anticoagulant protein C) ELISA Kit 人血浆抗凝蛋白C 96T

SIRT2 英文名称： 沉默调节相关蛋白2 0.1ml

蛇毒巴曲酶 Anti-Batroxobin 0.1ml

ERp72 英文名称： 内质网蛋白ERp72 0.2ml

细胞毒性受体NK-p46 Anti-CD335/NKp46/NCR1 0.1ml

Anti-Vimentin/Cy3 荧光素Cy3标记波形蛋白IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-GABRG2(Ser327) 磷酸化γ氨基丁酸γ2受体 规格 0.1ml

ChRM1(muscarinic acetylcholine receptor) 毒蕈碱型乙酰胆碱受体M1抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

大鼠抗核膜糖蛋白210(gp210)ELISA试剂盒英文名称：Rat Anti-glucoprotein 210,GP210 ELISA Kit特价供应

CHRNA9 英文名称： 型乙酰胆碱受体α9/AChRα9 0.2ml

Anti-EpCAM/CD326 上皮细胞粘附分子Multi-class antibodies规格： 0.2ml

IFN- Alpha/ BetaR(Human Interferon Alpha/ BetaReceptor) ELISA Kit 人α/β干扰素受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-Gab1 (Tyr659) 磷酸化接头蛋白Gab 1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的小鼠抗人IgG 规格 0.1ml

OTF2A(Human octamer transcription factor 2A) ELISA Kit 人八聚体转录因子 96T

SLC12A6 英文名称： 钾氯离子转运蛋白3 0.2ml