PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

膜醭毕赤酵母SEPCR/PROCR (Soluble Endothelial Protein C Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Pichia membranifaciens

嗜冷杆菌*EK (Eepidermal Keratin) ELISA Kit用途: 在无机盐培养基中以5mg/l的孔雀石绿为碳源，与1/6LB共代谢培养，2天内孔雀石绿降解率大于60%

白色短波单胞菌CK-HMW (Cytokeratin High Molecular Weight) ELISA Kit拉丁属名: Brevundimonas  alba

假单胞菌NRG-3 (Neuregulin 3) ELISA Kit用途: 可耐受高浓度对硝基酚，降解对硝基酚，降解率达30%-50%。

蜡样芽孢杆菌CASP3 (Caspase 3) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  cereus

拟茎点霉GRIK2 (Glutamate Receptor, Ionotropic, Kainate 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

白僵菌SNRPD1 (Small Nuclear Ribonucleoprotein Polypeptide D1) ELISA Kit 用途: 害虫生物防治

褐孢大秃马勃SDF-4 (Stromal Cell Derived Factor 4) ELISA Kit 拉丁属名: Lycoperdon excipuliforme

多根硬皮马勃AGPA (Anti-Glucoprotein 210 Antibody) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希氏杆菌ERK (Extracellular Signal Regulated Kinase) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

侧耳CYB561 (Cytochrome b-561) ELISA Kit 用途: 食用、药用

孔球孢霉PP (Protein Phosphatase) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

热带根瘤菌I-TAC (Interferon Inducible T-cell Alpha Chemoattractant) ELISA Kit拉丁属名: Rhizobium tropici

重金属铅速测试剂包IgA1 (Immunoglobulin A1) ELISA Kit 规格: 30份样品用量/包

粗皮马勃TL1A (Tumor Necrosis Factor Related Ligand 1A) ELISA Kit用途: 药用
猪细小病毒探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Anti-Calponin 1 钙调节蛋白-1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

猪可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒英文名称：Porcine Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1,sICAM-1 ELISA Kit进口/分装

猪可溶性内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA试剂盒英文名称：Porcine soluble vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2/sFLK-1 ELISA Kit进口/原装

猪可溶性细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒英文名称：Porcine soluble Vascuolar cell adhesion molecules 1,sVCAM-1 ELISA Kit特价供应

猪磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒英文名称：Porcine phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK ELISA Kit特价供应

猪病毒A(FLU A)ELISA试剂盒英文名称：Porcine Influenza viruses A,FLU A ELISA Kit进口/原装

MCP-1 人巨噬细胞趋化蛋白-1Multi-class antibodies规格： 48T

Calcitonin 英文名称： 降钙素 0.1ml

Anti-Notch1/MOTC 跨膜受体蛋白Notch-1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

KLK 8(Human urokinase-type plasminogen activator) ELISA Kit 人激肽释放酶8Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Nitric oxide/NO 一氧化氮Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh IKBKE/IKKi 核因子κB抑制蛋白E 规格 0.1ml

SLA(Human Proteinase 3 Antibody) ELISA Kit 人抗肝可溶性抗原 96T

phospho-PTPN6(Ser591) 英文名称： 磷酸化蛋白酪酸磷酸酶1C 0.1ml

大鼠肉毒碱脂酰转移酶(CACT)ELISA试剂盒英文名称：Rat carnitine-acylcarnitine translocase,CACT ELISA Kit进口/原装

大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒英文名称：Rat Lactate Dehydrogenase,LDH ELISA Kit特价促销

大鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA试剂盒英文名称：Rat Lactoferrin,LTF/LF ELISA Kit进口/原装

大鼠癌标志物-CA153ELISA试剂盒英文名称：Rat mammary carcinoma Marker-CA153 ELISA Kit进口/分装

GPA33(glycoprotein A33 transmembrane) 糖蛋白A33(跨膜)抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

MMP1 MMP-1 鼠单抗 (PE) Human

Rhesus antibody Rh phospho-CTNNBIP1 (Thr43/Ser50) 磷酸化β链接素相互作用蛋白1 规格 0.1ml

CHRNA1 英文名称： 乙酰胆碱受体前体蛋白AChRα1 0.1ml

Anti-Gab2 接头蛋白Gab 2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

HLA-G 小鼠白细胞抗原GMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-FABPB 脑型脂肪酸结合蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mre11/HNGS1 DNA损伤关键蛋白Mre11 规格 0.2ml

CNX(Human calnexin) ELISA Kit 人钙联蛋白 96T

Separase 英文名称： 外纺锤体极样蛋白1 0.2ml