PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

大肠埃希菌M-AChR M2 (Muscarinic Acetylcholine Receptor M2) ELISA Kit拉丁属名: coli

浅黄链霉菌VDR (Vitamin D Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces flaveolus

蕈青霉IL-2Rα (Interleukin 2 Receptor Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium paxilli

寄生曲霉DHEA-S (Dehydroepiandrosterone Sulfate) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  parasiticus

球孢白僵菌RIPK2 (Receptor TNFRSF Interacting Serine Threonine Kinase 2) ELISA Kit用途: 昆虫防治研究

Achromobacter piechaudiiPEX2 (Peroxisomal Biogenesis Factor 2) ELISA Kit 用途: 益生菌

深绿木霉FOXC1 (Forkhead Box Protein C1) ELISA Kit拉丁属名: Trichoderma atroviride

棒杆菌TAGLN (Transgelin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

木腐裂褶病菌Hepc (Hepcidin) ELISA Kit 拉丁属名: Schizophyllum commune Fr.

毛韧革菌ApoF (Apolipoprotein F) ELISA Kit 拉丁属名: Stereum hirsutum

边缘假单胞菌防风致种PHLDA2 (Pleckstrin Homology Like Domain Family A, Member 2) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas marginalis pv. pastinacae

CompostimonasTEF (Thyrotroph Embryonic Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Compostimonas  suwonensis

球孢白僵菌GPR120 (G Protein Coupled Receptor 120) ELISA Kit用途: 生物防治

香菇(神农5号)Grb10 (Growth Factor Receptor Bound Protein 10) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黄柄曲霉OFQ/N (Orphanin FQ/Nociceptin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
猪内源性逆转录病毒前病毒探针法荧光定量PCR试剂盒规格CD81 英文名称： CD81 0.1ml

Anti-Phospho-cdc25C (Thr48) 磷酸化细胞分裂周期蛋白25CMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Metronidazole/KLH 甲硝唑偶联血蓝蛋白Multi-class antibodies规格： 10mg

Anti-Phospho-CEBP beta (Thr235) 磷酸化转录调节因子CEBP βMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh OCIAD1 免疫反应抗原 规格 0.2ml

poly-L-lysine-Prep Slides 多聚赖酸磨砂玻片(片载玻片) 50片

TMEM176A 英文名称： 跨膜蛋白176A 0.1ml

Calcitonin receptor 英文名称： 降钙素受体 0.1ml

Anti-Phospho-eNOS (Ser1177) 磷酸化一氧化氮合成酶3(内皮型)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

ASCA(Human Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody) ELISA Kit 人抗酿酒酵母Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-peripherin 外周蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Histone H3-like protein 组蛋白H3样 规格 0.2ml

MHC III /AgB III /H-1 III ELISA Kit 大鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类 96T

phospho-PIK3 gamma (Thr1024) 英文名称： 磷酸化磷脂酰肌醇激酶PIK3-γ 0.1ml

Anti-TFR/CD71/FITC 荧光素标记转铁蛋白受体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-MAPKAPK2(Thr334) 磷酸化原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2 规格 0.1ml

neurofasciu-155 神经束蛋白-155Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人血浆抗凝蛋白S(PS) ELISA试剂盒 英文名称：Human plasma anticoagulant protein S,PS ELISA Kit特价促销

人血浆纤维连接蛋白(pFN)ELISA试剂盒 英文名称：Human Plasma fibronectin,pFN ELISA Kit进口/分装

人血凝素(HA)ELISA试剂盒英文名称：Human hemagglutinin，HA ELISA Kit进口/分装

人血清/糖皮质激素调节激酶2(GSK2)ELISA试剂盒英文名称：human serum/glucocorticoid regulated kinase 2,GSK2 ISA KIT特价促销

CHRDL2 英文名称： 新因子1 0.1ml

Anti-PIBF 孕激素诱导阻断因子Multi-class antibodies规格： 0.2ml

NE(Human neutrophil elastase) ELISA Kit 人中性粒细胞弹性蛋白酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CD303/BDCA-2 C型凝集素结构域家族4成员CMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IFRD1 干扰素相关发育调节蛋白1(神经生长因子诱导蛋白PC4) 规格 0.2ml

APF(Human anti-perinuclear factor) ELISA Kit 人抗核周因子 96T

PLSCR3 英文名称： 磷脂爬行酶3 0.2ml