PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

粉粒红湿伞MAG (Myelin Associated Glycoprotein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

*蛹虫草（北冬虫夏草、北虫草）TRY (Trypsin) ELISA Kit 拉丁属名: Cordyceps millitaris (L. ex Fr.) Link

顶孢头孢霉Ly6a (Lymphocyte Antigen 6 Complex Locus A) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

皱纹单胞菌CPR (Cytochrome P450 Reductase) ELISA Kit 拉丁属名: Rugamonas rubra

北极土地杆菌TAF2 (TATA Box Binding Protein Associated Factor 2) ELISA Kit拉丁属名: Pedobacter  arcticus

枯草芽孢杆菌TPO (Thyroid Peroxidase) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

隔离土地杆菌CT (Calcitonin) ELISA Kit拉丁属名: Pedobacter insulae

炭疽芽胞杆菌TECK/CCL25 (Thymus Expressed Chemokine) ELISA Kit 拉丁属名: anthracis

赖氨酸芽孢杆菌 拉丁属名：Lysinibacillus? odysseyi 规格：冻干物 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 模式菌株:模式菌株 主要用途:分类；研究；教学 特征特性:细胞呈直杆状，常以成对或链状排列，具圆端或方端。细胞染色大多数在幼龄培养时呈现革兰氏阳性，以周生鞭毛运动。每个细胞产一个芽孢，能适应许多不良环境。好氧或兼性厌氧。化能异养菌，具有发酵或呼吸代谢类型。通常接触酶阳性。 

细极链格孢 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 模式菌株：非模式菌株 主要用途：研究；教学 具体用途： 特征特性：菌落暗青色，分生孢子梗短链生或单生，卵形，倒棒状，淡青褐色至深青褐色，具横膈膜3-6个，纵、斜隔膜1-4个，分隔处略隘，25.0-39.5×9.0-13.0微米，喙及假喙柱状，淡褐色，5.0-27.5×2.5-3.5微米。

贾巴尔普尔毛壳 拉丁属名：Chaetomium jabalpurense 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

病毒 拉丁属名：Avian influenza virus 规格：冻干物 用途：研究 教学 检验 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

卷枝毛霉灰蓝变型 拉丁属名：Mucor circinelloides f. griseocyanus 规格：冻干物 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黏液杆菌 拉丁属名：Mucilaginibacter rigui 规格：冻干物 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:分类；研究；教学 特征特性:革兰氏阴性菌，严格好氧。无孢子形成，无运动性，菌落形态圆形，光滑。生长温度为4到37度，细胞大小0.4-0.8X0.8-2.5μm。 

Eucasphaeriacapensis Crous 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 拉丁属名：Eucasphaeria 种名加词：Eucasphaeria 模式菌株：非模式菌株 主要用途：研究；教学 具体用途： 特征特性：子囊孢子无色，guttulatae,梭形到椭圆形，略弯曲， 1隔, (17–)19–25(–28) × 3–)3.5(–4) µm。分生孢子无色，寄主植物上(16–)20–22(–27) × (2–)2.5(–3)，培养下(22–) 25–30(–40) × 3(–4) µm。  

藤黄色短小杆菌 拉丁属名：Curtobacterium luteum 用途：模式菌株 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黄孢平革菌 用途：红麻制浆 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 属名：Phanerochete 种名加词：chrysosporium 模式菌株：非模式菌株 主要用途：a:2:{i:0;s:4:研究;i:1;s:4: ;} 特征特性：寄生在没有生命的木材上，担子果革质，铺展状，菌盖蛤壳状，有一短柄，子实层孔状，生于菌褶上。菌落白色，菌肉白色；菌丝白色，蔓延于四周，低伏，基质膜状。 具体用途：红麻制浆

暗黄紫色小单孢菌 拉丁属名：Micromonospora fulvoviolacea 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

细极链格孢PLB (Phospholipase B) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

巴奈特酵母MTHFR (Methylenetetrahydrofolate Reductase) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces barnettii

烟管菌TTN (Titin) ELISA Kit拉丁属名: Bjerkandera adusta

布氏白僵菌（卵孢白僵菌）MCF (Macrophage Chemotatic Factor) ELISA Kit用途: 鞘翅目昆虫生物防治

枯草芽胞杆菌FCN1 (Ficolin 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母GKN1 (Gastrokine 1) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

大肠杆菌C/EBPδ (CCAAT/Enhancer Binding Protein, Delta) ELISA Kit用途: 教学科研，用于构建orf8缺失突变株。
邻单胞菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒规格人e(HBeAb)ELISA试剂盒 英文名称：Human anti-hepatitis B virus e antibody，HBeAb ELISA Kit特价供应

人表面(HBsAb)ELISA试剂盒 英文名称：Human anti-hepatitis B virus surface antibody，HBsAb ELISA Kit特价促销

人核心IgM(HBcAb-IgM)ELISA试剂盒 英文名称：Human anti-hepatitis B virus core IgM，HBc-IgM antibody ELISA Kit进口/原装

PHD3 (Egln3; HIF-prolyl hydroxylase 3) 脯氨酸羟化酶(多肽)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-B7-DC/CD273 程序性死亡配体2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ADRB2(Ser346) 磷酸化肾上腺素能受体β2 规格 0.1ml

Mast Cell Tryptase 浓缩液 0.1ml 进口分装

CACYBP 英文名称： 钙周期素结合蛋白 0.2ml

Anti-PPARGC1A/PGC-1 Alpha 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1αMulti-class antibodies规格： 0.2ml

LP Ab-IgA(Human Legionella antibody IgA) ELISA Kit 人军团菌IgAMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-Klf4 肠道内富含的Kruppel样因子/上皮锌指蛋白4Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh LASS4 长寿相关基因lASS4 规格 0.2ml

AChRab(Human acetylcholine receptor antibody) ELISA Kit 人乙酰胆碱受体 96T

PTPIP51 英文名称： 蛋白酪酸磷酸酶相互作用蛋白51 0.2ml

Desmoglein 3 英文名称： 桥粒芯蛋白3 0.1ml

β淀粉样肽β-Amyloid 1-40/Aβ1-40 C端 Anti-β-Amyloid 1-40/Aβ1-40 0.1ml

Anti-Z-DEVD-FMK/FITC 荧光素标记CASPASE3凋亡抑制剂IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Ezrin (Tyr353) 磷酸化埃兹蛋白 规格 0.1ml

Cyclin D2 周期素D2抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA试剂盒 英文名称：Human cartilage oligomeric matrix protein,COMP ELISA Kit特价促销

人软骨糖蛋白39(HC gp-39)ELISA试剂盒 英文名称：Human Cartilage glycoprotein 39,HC gp-39 ELISA Kit进口/原装

CHMP1A 英文名称： 染色质修饰蛋白1A 0.2ml

Anti-PAX1 配对盒基因1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

ICE(Human Interleukin 1 Beta converting enzyme) ELISA Kit 人白介素1β转换酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NDRG1/Cap43 分化相关基因NDRG1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IL-4I1 白细胞介素4诱导蛋白1 规格 0.2ml

MMP-13 ELISA kit 大鼠基质金属蛋白酶13 96T

PRMT6 英文名称： 组蛋白精酸甲基转移酶6 0.1ml