PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

休哈塔假丝酵母c-myc (c-myc Oncogene Product) ELISA Kit拉丁属名: Candida shehatae H.R.Buckley&Uden

安络小皮伞*GAL12 (Galectin 12 ) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希菌CKMT1A (Creatine Kinase, Mitochondrial 1A ) ELISA Kit 拉丁属名: coli

假单胞菌属PCDH1 (Protocadherin 1) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  sp

少根根霉TXB2 (Thromboxane B2) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus arrhizus

大肠埃希氏杆菌FGL2 (Fibrinogen Like Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

枯草芽孢杆菌AGGF1 (Angiogenic Factor with G Patch and FHA Domains 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

*灰葡萄孢DSG-E1 (Desmogleins 1) ELISA Kit用途: 水果保鲜研究

栗褐芽孢杆菌CR2/CD21 (Complement Receptor 2) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus badius

苹果链格孢HB (Hemoglobin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌SCT (Secretin) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

黑曲霉CD23/FcεRII (Receptor II for the Fc Region of Immunoglobulin E) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus niger

坚菌丝单顶孢 拉丁属名：Monacrosporium sclerohypha 规格：冻干物 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

近弧状短波单胞菌 拉丁属名：Brevundimonas subvibrioides 规格：冻干物 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:分类；研究；教学 特征特性:菌株呈杆状，革兰氏染色为阴性，繁殖方式为裂殖。菌落为圆形，凸起，表面湿润光滑，边缘整齐。营养类型为异养，好氧，不需光照。 

斯氏土地杆菌 拉丁属名：Pedobacter steynii 规格：冻干物 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:分类；研究；教学 特征特性:菌株为呈杆状，革兰氏染色为阴性，繁殖方式为裂殖。菌落为圆形，凸起，表面湿润光滑，边缘整齐。营养类型为异养，好氧，不需光照。 

单色革盖菌 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 拉丁属名 ： Cerrena 种名加词 ： unicolor (Bull.) Murrill 模式菌株 ： 非模式菌株 主要用途 ： 研究；教学 具体用途 ： 特征特性 ： 子实体直径4～8cm，厚0.5cm，扇形，贝壳或平伏而反卷，革质。往往侧面相连，表面白色、灰色至浅褐色，有时因有藻类附生呈绿色，有细长的毛或粗毛和同心环带。边缘薄而锐，波浪状或瓣裂，下侧无子实层。菌肉白色或近白色，厚0.1 cm，在菌肉及毛层之间有一条黑线。无菌柄。菌管近白色、灰色，管孔面灰色到紫褐色，孔口迷宫状，平均每毫米2个，很快裂成齿状，但靠边缘的孔口很少开裂。担孢子长方形，光滑，无色，(4.5～6)μm×(3～3.5)μm。桦、杨、柳、花楸等树的伐桩、枯立木、倒木上覆瓦状排列。分布较广泛。使树木侵 

蜡磨属 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 拉丁属名：Laccaria 种名加词：sp.

沙漠奇异球菌 拉丁属名：Deinococcus deserti 规格：冻干物 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:分类；研究；教学 特征特性:非模式菌株。球形，多聚排列，G+，无芽孢，异养，好氧，不需光照,利用葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、海藻糖、密二糖、棉子糖、松三糖、可溶性淀粉、D木糖、L阿拉伯糖、乙醇、甘油、核糖醇、D甘露醇、D山梨糖醇、DL乳酸、琥珀酸；不利用肌醇、菊糖；同化肌酸甘油合成研究 

嗜线虫致病杆菌 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 属名：Xenorhabdu 种名加词：nematophila 模式菌株：非模式菌株 主要用途：a:2:{i:0;s:4:分类;i:1;s:4:研究;} 特征特性：菌落形态、大小、质地、颜色等:菌落圆形，1-2um,乳白色;液体培养情况:在蛋白冻液体培养基中生长良好;半固体琼脂培养基中的穿刺生长情况:生长;明胶穿刺培养情况:水解阳性;荧光色素的产生:不产生;其他培养特征:吸收溴百里酚蓝，不吸收中性红;各种代谢反应如：糖、醇的发酵，牛奶反应等:可利用葡萄糖、麦芽糖、甘露糖、纤维二糖、糊精产酸，不能利用果糖、肝糖、蔗糖、甘油、水杨苷、七叶苷等产酸。可以利用甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乳酸盐、丁二酸等，不能利用丙二酸盐、葡萄糖酸盐、柠檬酸盐等；石蕊牛奶还原 、胨化但不凝结;形状, 大小, 排列:杆状，散布0.5-1.6x3.1-21.9;运动性, 鞭毛:周生鞭毛，运动;芽孢, 荚膜:不产生芽孢;革兰氏染色反应:阴性;细胞内含物及贮存物:有折射体;繁殖方式:二分裂法

比莱青霉 拉丁属名：Penicillium bilaiae 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

产气荚膜梭菌 毒素A型 拉丁属名：perfringens Type A 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 特征特性中监所，C57－15。肠仔猪肠。强毒株，肉肝胃酶消化汤培养物上清注射0.05－0.025ml可致死小白鼠。培养基2或3，35－37℃。

秃裸链霉菌 用途：产生代谢产物具有抑菌活性 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 属名：Streptomyces 种名加词：calvus 模式菌株：非模式菌株 主要用途：a:2:{i:0;s:4:研究;i:1;s:4: ;} 特征特性：孢子丝弯曲；孢子长圆形；不产H2S；产类黑色素；明胶液化快；纤维素上生长；牛奶凝固并胨化；利用L-阿拉伯糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、鼠李糖、棉子糖、肌醇、D-甘露醇；细胞壁含有LL-2.6二氨基庚二酸、甘氨酸、葡萄糖、乳糖。 具体用途：产生代谢产物具有抑菌活性

西班牙盐盒菌 拉丁属名：Haloarcula hispanica 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

小克银汉霉C0 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 拉丁属名：Cunninghamella 种名加词：echinulata (Thaxt.) Thaxt. ex Blakeslee 主要用途： 具体用途： 特征特性：小孢囊梗从菌丝伸出，直立，分枝，有时有隔膜，顶端形成泡囊，满生细刺，上生单细胞，球形、卵形或洋梨形表面有刺的孢子；孢子可脱落。在高温下能生长，孢囊根分枝假轴状、聚伞状或不规则，有长刺

Termitomyces bulborhizus 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用 拉丁属名：Termitomyces 种名加词：Termitomyces

葡萄座腔菌CYP1B1 (Cytochrome P450 1B1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

拟黑马朗假丝酵母LTC4 (Leukotriene C4) ELISA Kit拉丁属名: Candida pseudohaemulonii

Bacillus aryabhattaiPDGFD (Platelet Derived Growth Factor D) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
圆弧青霉探针法荧光定量PCR试剂盒规格兔吡啶交联物(PY)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit pyridinium crosslink/PyriLinks,PY ELISA Kit 特价供应

兔补体蛋白3(C3)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit Complement 3,C3 ELISA Kit进口/分装

兔超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit 进口/分装

IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-mouse、rat 干扰素-γ多肽抗原(大、小鼠)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CDC42 细胞分化周期CDC42蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh OMPC 大肠杆菌外膜孔道蛋白C 规格 0.1ml

CST1 Kit Human 人 Cystatin SN / CST1 ELISA配对 ELISA

CA13 英文名称： 碳酸酐酶13 0.2ml

Anti-Phospho-LAT (Tyr171) 磷酸化T细胞活化连接蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

VLDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit 人极受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-LAMR1 层粘连蛋白受体1(N端)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh ITGB4 整合素β4 规格 0.1ml

EPO ELISA Kit 大鼠红细胞生成素 96T

Piccolo 英文名称： 神经细胞突触蛋白PCLO 0.2ml

Vinexin 英文名称： 细胞间粘附蛋白Vinexin 0.1ml

phospho-DAAM1 (Thr361) 英文名称： 磷酸化形态发生紊乱关联激活因子1 0.1ml

Anti-ALR 肝再生增强因子Multi-class antibodies规格： 0.2ml

EPHB4 英文名称： 酪酸蛋白激酶受体B4 0.1ml

细胞因子信号传导抑制蛋白3 Anti-Socs 3 0.2ml

Anti-CD72/Ly-32/FITC 荧光素标记CD72IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-MAPKAPK2(Ser272) 磷酸化原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2 规格 0.1ml

CHD3 英文名称： 染色质解旋酶DNA结合蛋白3 0.1ml

Anti-URG4 上调基因4(N端)Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Human c-fos ELISA Kit 人c-fosMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-Histone H3 (Thr3) 磷酸化组蛋白3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Metallothionein 金属硫蛋白 规格 0.2ml

IDUA(Human Alpha-L-iduronidase) ELISA Kit 人αL艾杜糖苷酸酶 96T

Retinoic acid induced 17 英文名称： 维诱导蛋白17 0.2ml