PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

链霉菌属SIGLEC3 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 3) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces  sp.

枯草芽孢杆菌CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

侵蚀侏儒囊菌MIP-5 (Macrophage Inflammatory Protein 5) ELISA Kit 拉丁属名: Nannocystis exedens

酿酒酵母CA1 (Carbonic Anhydrase I) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

地衣芽孢杆菌Cx (Connexin) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  licheniformis

枯草芽孢杆菌MIP-3β/ELC/CCL19 (Macrophage Inflammatory Protein 3β) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

蜂房类芽孢杆菌C-P (C-Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Paenibacillus alvei

红法夫酵母SOD3 (Superoxide Dismutase 3, Extracellular) ELISA Kit拉丁属名: Phaffia rhodozyma

CitricoccusGDF2 (Growth Differentiation Factor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Citricoccus zhacaiensis

根瘤菌属PRELP (Proline Arginine Rich End Leucine Rich Repeat Protein) ELISA Kit拉丁属名: Rhizobium  alkalisoli

沙针拟盘多毛孢NOX5 (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 5) ELISA Kit拉丁属名: Pestalotiopsis osyridis

伞菌假单胞菌GAL4 (Galectin 4) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas agarici

酿酒酵母CLA (Collagen Autoantibody) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

枯草芽孢杆菌枯草亚种NA/NE (Noradrenaline/Norepinephrine) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis subsp. subtilis

炭黑曲霉CDK2 (Cyclin Dependent Kinase 2) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus carbonarius
野牛奥斯特线虫探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Apolipoprotein E 英文名称： 载脂蛋白E 0.1ml

Anti-phospho-Bim(Ser69) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化细胞死亡调解子IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

IL-3(Mouse Interleukin 3) ELISA Kit 小鼠白介素3Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CCP/FITC 荧光素标记兔抗瓜氨酸环肽IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh EDG3 内皮分化型G蛋白偶联受体3 规格 0.2ml

I CTP ELISA Kit 大鼠Ⅰ型胶原交联羧基末端肽 96T

MRP8+MRP14 英文名称： 多药耐药相关蛋白8/9/14 0.2ml

C9ORF43 英文名称： 9号染色体开放阅读框43 0.2ml

Anti-OAT-3 阴离子转运蛋白-3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

iNOS(Human inducible nitric oxide synthase) ELISA KIT 人诱导型一氧化氮合成酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-OAT-1/SLC22A6 阴离子转运蛋白-1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh IFI78/MX1 干扰素诱导蛋白P78 规格 0.1ml

GP-MM(Mouse Glycogen phosphorylase MM)ELISA Kit 小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM 96T

PCDHA8 英文名称： 原钙粘附蛋白α8 0.2ml

beta-Amyloid(25-35) 英文名称： β淀粉样肽(25-35) 0.1ml

Anti-Tie2 生成素受体2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

sPLA2 (Rat secreted phospholipase A2,sPLA2) ELISA Kit 大鼠分泌型磷脂酶A2Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Stra8 视黄酸激活基因8Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-human IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的羊抗人IgG 规格 0.1ml

LDL-IC ELISA Kit 大鼠免疫复合物 96T

NCKAP1L 英文名称： 造血蛋白1 0.2ml

CFDP1 英文名称： 颅面部发育蛋白1 0.2ml

Anti-MMP-15 基质金属蛋白酶-15Multi-class antibodies规格： 0.1ml

PWM(Human poke* mitogen) ELISA Kit 人美洲商陆素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-MBP 髓鞘碱性蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh KAT4 细胞周期基因1蛋白 规格 0.1ml

CYT Ab(Human Cysticercosis antybody) ELISA Kit 人囊虫病 96T

PHKG2 英文名称： 磷酸化酶激酶γ2 0.2ml