PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

树舌CCL14 (Chemokine C-C-Motif Ligand 14) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

冷弯曲菌PRDX2 (Peroxiredoxin 2) ELISA Kit拉丁属名: Psychroflexus  sp.

酿酒酵母ETRB (Endothelin Receptor B) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

掷孢酵母GPC3 (Glypican 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

玫烟色拟青霉（10个工作日）NUP85 (Nucleoporin 85kDa) ELISA Kit拉丁属名: Paecilomyces  fumosoroseus

黄曲霉PLD2 (Phospholipase D2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

赤霉菌属CVNPF (Cobra Venom Neuronal Protective Factor) ELISA Kit拉丁属名: Gibberella  sp.

葫芦小丛壳MMP-17 (Matrix Metalloproteinase 17) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母ProGRP (Pro-Gastrin Releasing Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

枯草芽孢杆菌EPOR (Erythropoietin Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

长白山伞枝霉ALDH (Aldehyde Dehydrogenase, Mitochondrial) ELISA Kit拉丁属名: Umbelopsis changbaiensis

巨大芽孢杆菌NT-4 (Neurotrophin 4) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  megaterium

放射形根瘤菌FGFR4 (Fibroblast Growth Factor Receptor 4) ELISA Kit 用途: 固氮

阿魏侧耳-天山2号ApoB (Apolipoprotein B) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

淡紫拟青霉26S-PSM (26S Proteasome) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
四角瑞氏探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Vitamin D Receptor/VDR 英文名称： 维生素D3受体 0.1ml

phospho-Dnmt1(Ser154) 英文名称： 磷酸化DNA甲基转移酶1 0.1ml

Anti-AIMP2 AIMP2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Phospho-EGFR (Ser1045) 英文名称： 磷酸化表皮生长因子受体 0.1ml

可溶性载质转运蛋白22A17 Anti-Slc22A17 0.2ml

Anti-Tenascin/TN /FITC 荧光素标记细胞粘合素IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MCAM(Tyr641) 磷酸化细胞粘附分子CD146 规格 0.1ml

CAPS1 英文名称： 钙依赖分泌激活蛋白1 0.2ml

Anti-GADD153 GADD153Multi-class antibodies规格： 0.2ml

MSA(Human mitotic spindle apparatus antibody) ELISA Kit 人抗纺锤体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Inhibin beta A 抑制素βAMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh LMW Kininogen/Kininogen 1 低分子量生长促进因子(激肽原1) 规格 0.2ml

Gbp4(Human guanylate nucleotide binding protein 4) ELISA Kit 人鸟苷酸结合蛋白4 96T

RGS4 英文名称： 相关蛋白9 0.2ml

Anti-Collagen I Ⅰ型胶原Multi-class antibodies规格： 0.1ml

小鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Activin A,ACV-A ELISA Kit进口/分装

小鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse Activin A,ACV-A ELISA Kit进口/原装

小鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Troponin Ⅰ,Tn-Ⅰ ELISA Kit进口/分装

小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse Troponin T,Tn-T ELISA Kit特价促销

小鼠肌红蛋白(MYO/MB)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Myoglobin,MYO/MB ELISA Kit特价促销

PGF2 Alpha ELISA Kit 大鼠素F2αMulti-class antibodies规格： 48T

CK16 英文名称： 细胞角蛋白16 0.1ml

Anti-Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser104/106) 磷酸化雌激素受体αMulti-class antibodies规格： 0.1ml

cAMP 小鼠环-磷酸腺苷Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-ER-alpha/beta 雌激素受体α/βMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MSH3 错配修复蛋白3 规格 0.2ml

PAPP-A(Human pregnancy associated plasma protein A) ELISA Kit 人相关血浆蛋白A 96T

phospho-SYT1(Thr202) 英文名称： 磷酸化突触结合蛋白1 0.1ml