PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

食酸菌属ADIPOR1 (Adiponectin Receptor 1) ELISA Kit拉丁属名: Acidovorax  sp.

淡色生赤壳GHRH (Growth Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Bionectria ochroleuca

果蔬汁 毒死蜱、 氯菊酯、多效唑、 哒螨灵MRC2 (Mannose Receptor C Type 2) ELISA Kit拉丁属名: 果蔬汁 毒死蜱、 氯菊酯、多效唑、 哒螨灵

针孢链霉菌BMP-7 (Bone Morphogenetic Protein 7) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces aculeolatus

枯草芽孢杆菌PRB (Retinoblastoma Tumor Suppressor Protein) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

菜豆拟茎点霉IL-23 p40(Interleukin 23) ELISA Kit拉丁属名: Phomopsis phaseoli

肠杆菌属SIGLEC3 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

工业碱速测包（用于水发产品）GAL8 (Galectin 8) ELISA Kit 规格: 40份样品试剂用量/包

立枯丝核菌Dyn (Big Dynorphin) ELISA Kit拉丁属名: Rhizoctonia  solani

冬虫夏草MT1E (Metallothionein 1E) ELISA Kit拉丁属名: Ophiocordyceps  sinensis

耐热盐土生古菌VLDLR (Very Low Density Lipoprotein Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Haloterrigena thermotolerans

明尼苏达被毛孢TF (Transfer Factor) ELISA Kit拉丁属名: Hirsula minnesotensis

枯草芽孢杆菌MUC1 (Mucin 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

大肠埃希氏菌CCA (Colon Cancer Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

球孢白僵菌CTSC (Cathepsin C) ELISA Kit用途: 生防
棘盘瑞氏探针法荧光定量PCR试剂盒规格Leptin 瘦素(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CD2 CD2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PAI-2/SerpinB2 纤溶酶原激活物抑制因子2(血浆酶原激活酶抑制因子-2) 规格 0.1ml

COQ7 Kit Human 人 COQ7 ELISA配对 ELISA

Tsg101 英文名称： 易感基因101蛋白 0.1ml

C6orf150 英文名称： 6号染色体开放阅读框150 0.1ml

Anti-CD2 CD2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Cappuccino 英文名称： Cappuccino蛋白 0.2ml

Anti-CD158i NK细胞抑制性受体2DS4Multi-class antibodies规格： 0.2ml

HIF-1Alpha (Hypoxia-inducible factor -1Alpha) 缺氧诱导因子1α (抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CD166/ALCAM/MEMD 活化白细胞粘附分子Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PAR3 蛋白酶激活受体3 规格 0.2ml

TREM2 Kit Human 人 TREM-2 / TREM2 ELISA配对 ELISA

phospho-TPH (Ser260) 英文名称： 磷酸化色酸羟化酶 0.1ml

人弹性蛋白酶(Elastase)ELISA试剂盒 英文名称：Human Elastase ELISA Kit进口/原装

人蛋白C(Protein C)ELISA试剂盒英文名称：Human Protein C ELISA Kit进口/原装

人蛋白S(Protein S)ELISA试剂盒英文名称：Human Protein S ELISA Kit进口/原装

L-HDC (L-Histidine decarboxylase) L-组氨酸脱羧酶抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Angiotensin II type 1A receptor 紧张素Ⅱ1A型受体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-CaMK2 alpha (Thr305) 磷酸化钙/钙调素依赖蛋白激酶2α 规格 0.1ml

过氧化物酶阻断剂B 10ml 推荐用于石蜡切片,孵育10分钟.

CK15 英文名称： 细胞角蛋白15 0.1ml

Anti-ILTV 鸡喉病毒Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Human LDL-IC ELISA Kit 人免疫复合物Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-IL5RA/CD125 白介素-5受体α链Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh LRCH4 富含亮氨酸重复家庭蛋白4 规格 0.2ml

Apo-E(Human Apolipoprotein E) ELISA Kit 人载脂蛋白E 96T

RELM beta 英文名称： 相关基因蛋白(resistin-like β) 0.1ml