PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

哈茨木霉FGF6 (Fibroblast Growth Factor 6) ELISA Kit 拉丁属名: Trichoderma harzianum

亮白曲霉CK-19/KRT19 (Cytokeratin 19) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus candidus Link

伯克霍尔德菌*NRG-3 (Neuregulin 3) ELISA Kit拉丁属名: Burkholderia sp.

枯草芽胞杆菌ACD (Adrenocortical Dysplasia Homolog) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

松口蘑ARO (Aromatase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

普通变形杆菌*Cyt-C (Cytochrome C) ELISA Kit拉丁属名: Proteus vulgaris

中间气单胞菌CT (Calcitonin) ELISA Kit拉丁属名: Aeromonas   media

地衣芽胞杆菌sICAM-1 (Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus licheniformis

巴氏醋杆菌Pro-MMP-1 (pro-Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit拉丁属名: Acetobacter  pasteurianus

冰川薄层菌属ANGPTL6 (Angiopoietin Like Protein 6) ELISA Kit 拉丁属名: Hymenobacter glaciei

酿酒酵母GAP (GTPase Activating Protein) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

总状毛霉TIMP-1 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 1) ELISA Kit拉丁属名: Mucor racemosus

枯草芽孢杆菌PG (Proteoglycan) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

围小丛壳菌LDHC (Lactate Dehydrogenase C) ELISA Kit 用途: 植物病原物，用于种群的遗传学研究和炭疽病害的诊断和防治

哈茨木霉D4R/DRD4 (Dopamine Receptor D4) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
假单胞菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 Cytokeratin 19 英文名称： 细胞角蛋白19 0.1ml

Anti-Phospho-c-Kit (Tyr719) 磷酸化原癌基因c-kitMulti-class antibodies规格： 0.1ml

鸭白介素6(IL-6)ELISA试剂盒 英文名称：Duck Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit 进口/原装

鸭白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒英文名称：Duck Interleukin-8,IL-8 ELISA Kit进口/分装

鸭毒(DEV)ELISA试剂盒英文名称：Duck virus enteritis,DEV ELISA Kit 进口/分装

鸭环磷酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒英文名称：Duck cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit 进口/原装

鸭抗凝血素(aPT1/aPT2)ELISA试剂盒英文名称：Duck anti-prothrombins antibodies,aPT1/aPT2 ELISA Kit 进口/分装

CANX 英文名称： 钙连蛋白 0.1ml

Anti-IL-28B/IL-28C 白细胞介素28BMulti-class antibodies规格： 0.2ml

CK-13(Human cytokeratin 13) ELISA Kit 人细胞角蛋白13Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-HBV pre S1/S2 protein 人乙毒pre S1/S2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mitochondrial ribosomal protein L11 线粒体核糖体蛋白L11 规格 0.2ml

E3/UBPL(Human E3/ubiquitin-protein ligase) ELISA Kit 人泛素连接酶 96T

phospho-Rb (Ser780) 英文名称： 磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白 0.1ml

Phospho-Bad (Ser134) 英文名称： 磷酸化相关死亡促进因子 0.1ml

Anti-Stra8 视黄酸激活基因8Multi-class antibodies规格： 0.2ml

human major vault protein,MVP ELISA Kit 人主要穹窿蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-SIRT1 沉默调节蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-rat IgG/Cy7 Cy7标记的羊抗大鼠IgG 规格 0.1ml

SHBG(Mouse sex hormone-binding globulin) ELISA Kit 小鼠性激素结合球蛋白 96T

NCKAP1 英文名称： 膜相关的蛋白质HEM2 0.2ml

CITED1 英文名称： 结合转化激活因子CITED1 0.2ml

Anti-MBP 髓鞘碱性蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Human preptin ELISA Kit 人preptinMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-HCMV 人巨细胞病毒Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh KAT2B/ GCN5/PCAF 组蛋白乙酰转移酶PCAF 规格 0.1ml

IL-8/CXCL8 ELISA Kit 大鼠白介素8 96T

PHKG1 英文名称： 磷酸化酶激酶γ1 0.2ml