PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

芽孢杆菌COLEC11 (Collectin Sub-Family Member 11) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus sp.

三叶草根瘤菌PDXK (Pyridoxal Kinase) ELISA Kit用途: 与三叶草共生固氮

产黄青霉TNF-α (Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium chrysogenum

芽孢杆菌属GSTω1 (Glutathione S Transferase Omega 1) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  sp.

珊瑚链霉菌GDF11 (Growth Differentiation Factor 11) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces coralus Dietz

冷海水黄杆菌CD30L (Cluster of Differentiation 30 Lligand) ELISA Kit 拉丁属名: Flavobacterium frigidimaris

弗雷德里克斯堡假单胞菌TGM2 (Transglutaminase 2, Tissue) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas frederiksbergensis

墨汁鬼伞FBL (Fibrillarin) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

新月弯孢CA153 (Carbohydrate Antigen 153) ELISA Kit用途: 研究

酿酒酵母RGS4 (Regulator of G Protein Signaling 4) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

热带假丝酵母C5b (Complement Fragment 5b) ELISA Kit拉丁属名: Candida tropicalis

酿酒酵母GROγ (Growth Regulated Oncogene Gamma) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

土星拟威尔酵母subsufficiens变种RUNX2 (Runt-Related Transcription Factor 2) ELISA Kit拉丁属名: Williopsis saturnus var. subsufficiens

聚生壳菌IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit用途: 林木病原菌

弗尼青霉FZD8 (Frizzled Homolog 8) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium phoeniceum
斯氏普罗威登斯菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书CYP46 英文名称： 胆固醇24S-羟化酶 0.2ml

Anti-Gentamicin 庆大霉素Multi-class antibodies规格： 0.2ml

GDNF 人神经胶质细胞系衍化神经营养因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Cyclin A 周期素AMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NGALR/Slc22A17 可溶性载质转运蛋白22A17 规格 0.1ml

Human adaptor molecule apoptotic peptidase activating factor 1,APAF1 ELISA Kit 人衔接蛋白酶活化因子1 96T

TLR4 英文名称： Toll样受体4 0.1ml

CaMK2 alpha 英文名称： 钙/钙调素依赖蛋白激酶2α 0.1ml

Anti-PAFR/PTAFR 血小板活化因子受体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

MYO/MB(Human Myoglobin) ELISA Kit 人肌红蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-PAK1 p21激活激酶1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh HPV16-E6 人类状瘤病毒16 规格 0.1ml

Free-T3(Mouse Free Tri-iodothyronine Indes) ELISA Kit 小鼠游离三甲状腺原酸 96T

Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr751) 英文名称： 磷酸化血小板源性生长因子受体-B 0.1ml

大鼠17-酮类固醇(17-KS)ELISA试剂盒英文名称：Rat 17-ketosteroids,17-KS ELISA Kit 进口/分装

大鼠25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA试剂盒英文名称：Rat 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA Kit特价促销

GATA-4(GATA binding factor 4) GATA结合蛋白4抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

EPHB3 EphB3 / HEK2 兔单抗 (PE) Mouse

Rhesus antibody Rh Phospho-DARPP32(Thr75) 磷酸化多巴胺/cAMP调节磷蛋白 规格 0.1ml

非预染蛋白Marker分子量标准(14.4-116kDa) 2x1000μl/400次 MBI原装

Zyxin 英文名称： 斑联蛋白 0.2ml

CINP 英文名称： CDK2相互作用蛋白 0.2ml

Anti-Phospho-FRA1 (Ser265) 磷酸化FRA-1蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

E2(Ret) 大鼠雌二醇Multi-class antibodies规格： 96T

Anti-ECE1 内皮素转化酶1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh N acetylglucosamine kinase N-乙酰氨基葡萄糖激酶 规格 0.2ml

pMHC(Human peptide major histocompatibility complex) ELISA Kit 人肽-主要组织相容性复合体复合物 96T

Stella 英文名称： 发育多能性相关蛋白3 0.2ml