PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

毛霉属CYTH1 (Cytohesin 1) ELISA Kit 拉丁属名: Mucor sp.

皱褶莫氏黑粉菌CDK7 (Cyclin Dependent Kinase 7) ELISA Kit拉丁属名: Moesziomyces rugulosus

浅黄色假单胞菌BAFF/CD257/TNFSF13B (B-Cell Activating Factor) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas lurida

植物乳杆菌PC4 (Positive Cofactor 4) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  plantarum

燕麦嗜酸菌西瓜亚种*COMP (Cartilage Oligomeric Matrix Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大果毛壳IL-9 (Interleukin 9) ELISA Kit拉丁属名: Chaetomium megalocarpum

ActinomonosporaCOL6α3 (Collagen Type VI Alpha 3) ELISA Kit 拉丁属名: Actinomonospora sp.

炭疽芽胞杆菌AMY1 (Amylase Alpha 1, Salivary) ELISA Kit拉丁属名:  anthracis

杀链霉菌NUP107 (Nucleoporin 107kDa) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces tubercidicus

大肠埃希菌ATA (Angiotensinase A) ELISA Kit拉丁属名: coli

费氏中华根瘤菌EGR3 (Early Growth Response Protein 3) ELISA Kit 用途: 能与我国栽培大豆共生固氮

毒三素链霉菌OVA sIgG (Ovalbumin Specific IgG) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces toxytricini

香气红冬孢锁掷孢酵母bFGF/FGF2 (Basic Fibroblast Growth Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Rhodosporidiobolus odoratus

阿萨希丝孢酵母CD59 (Protectin) ELISA Kit 拉丁属名: Trichosporon asahii

犹他游动放线菌TRF (Transferrin) ELISA Kit拉丁属名: Actinoplanes utahensis
黑色普雷沃菌探针法荧光定量PCR试剂盒供应商AXL 英文名称： 粘附相关激酶 0.1ml

Anti-FLASH/CASP8AP2/FITC 荧光素标记半胱氨酸蛋白酶8相关蛋白2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Ach ELISA Kit 大鼠乙酰胆碱Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-ACE2/FITC 荧光素标记紧张素转换酶2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Fibrinogen gamma chain 人纤维蛋白原γ链 规格 0.2ml

PP(Mouse Protein Phosphatase) ELISA Kit 小鼠蛋白磷酸酶 96T

MMP24 英文名称： 基质金属蛋白酶-24 0.1ml

Calcyphosine 2 英文名称： 钙磷蛋白2 0.2ml

Anti-NRF-1 核呼吸因子-1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

LEPR(Human Leptin Receptor) ELISA Kit 人瘦素受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-P53 (Ser33) 磷酸化抑制基因P53Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HSP27/HspB1/HSP25 热休克蛋白27 规格 0.1ml

ANNA-2/Ri(Human neuronal nuclear autoantibody) ELISA Kit 人抗神经元核2型/抗Ri 96T

Parkin 英文名称： 帕金蛋白 0.1ml

小鼠神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Nerve growth factor,NGF ELISA Kit 特价供应

小鼠神经丝蛋白(NF)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse neurofilament protein,NF ELISA Kit特价供应

COX-2(human) 人素氧化环化酶2Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CD150/SLAM 信号淋巴细胞活化分子CD150Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NIPA 间变性激酶核相互作用伴侣蛋白 规格 0.2ml

Human Calreticulin,CRT ELISA Kit 人钙网蛋白 96T

TRIB2 英文名称： MAPK调控蛋白TRB2 0.2ml

CHRNA6 英文名称： 型乙酰胆碱受体α6/AChRα6 0.2ml

Anti-E.coli O6 大肠杆菌埃希杆菌O6(肠致病性大肠杆菌O6)Multi-class antibodies规格： 0.2ml

CSF(Human colony-stimulating factor) ELISA Kit 人集落刺激因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-GAP43(Ser41) 磷酸化神经生长相关蛋白43Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-Cy7 PE-Cy7标记的鼠抗人IgG单克隆 规格 0.1ml

CLEC4E(Human C-type lectin domain family 4 member e) ELISA Kit 人C型凝集素结构域家族4成员E 96T

phospho-RUNX3(Ser338) 英文名称： 磷酸化Runx3 0.1ml