PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

核果尾孢CKLF (Chemokine Like Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Mycosphaerella cerasella Aderh.

新月弯孢GDF5 (Growth Differentiation Factor 5) ELISA Kit 用途: 研究

亚美尼亚小脆柄菇ATF6 (Activating Transcription Factor 6) ELISA Kit拉丁属名: Psathyrella armeniaca Pegler

潮湿学校拟诺卡氏菌PICP (Procollagen I C-terminal Propeptide) ELISA Kit 拉丁属名: Nocardiopsis umidischolae

苍白杆菌GAL1 (Galectin 1 ) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

肉糜  牛源性成分（定性）MMP-12 (Matrix Metalloproteinase 12) ELISA Kit拉丁属名: 肉糜  牛源性成分（定性）

岛生异担子菌NTRK3 (Neurotrophic Tyrosine Kinase Receptor Type 3 ) ELISA Kit 拉丁属名: Heterobasidion insulare

枯草芽胞杆菌CCND3 (Cyclin-D3) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

灰葡萄孢（灰霉病菌）NTXI (Cross Linked N-telopeptide of Type I Collagen) ELISA Kit用途: 教学科研

毛壳ATM (Ataxia Telangiectasia Mutated) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

红缘层孔菌 PDGFRL (Platelet Derived Growth Factor Receptor Like Protein) ELISA Kit 用途: 药用

马泰勒虫（青海湟源株）GC (Glycocalicin) ELISA Kit拉丁属名: equi

绒毛栓菌GATA5 (GATA Binding Protein 5) ELISA Kit 拉丁属名: Trametes pubescens

短短芽孢杆菌FDP (Fibrinogen Degradation Product) ELISA Kit拉丁属名: Brevibacillus brevis

枯草芽孢杆菌TAFI (Thrombin Activatable Fibrinolysis Inhibitor) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis
卡氏肺孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒供应商人内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)ELISA试剂盒英文名称：Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1,VEGFR-1/Flt1 ELISA Kit 进口/原装

人内皮细胞生长因子受体3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA试剂盒英文名称：Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2,VEGFR-2/Flk-1 ELISA Kit 进口/分装

人内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒 英文名称：Human Vascuolar cell adhesion molecule 1，VCAM-1 ELISA Kit 特价促销

IgA ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白AMulti-class antibodies规格： 48T

Anti- Beta-Actin/FITC 荧光素标记β-肌动蛋白IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FGF3/Oncogene INT2 纤维母细胞生长因子3 规格 0.1ml

Alpha1-MG(Mouse Alpha1-microglobulin) ELISA Kit 小鼠α1微球蛋白 96T

Cadherin 10 英文名称： 钙粘附分子10 0.2ml

Anti-Integrin alpha V/CD51 整合素αVMulti-class antibodies规格： 0.2ml

LTA(Human lipoteichoic acids) ELISA Kit 人脂磷壁酸Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-PEG10 高表达基因Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HIV p55+NP7 病毒 规格 0.2ml

PI Ab-IgG/IgM(Mouse phosphatidylinositol antibody IgG/IgM) ELISA Kit 小鼠磷脂酰肌醇IgG/IgM 96T

PMFBP1 英文名称： 多胺调制因子结合蛋白1 0.2ml

BIN1 英文名称： 桥连整合因子蛋白 0.1ml

Anti-TFF2 三叶肽因子2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Human latent membrane protein-1,LMP-1 ELISA Kit 人潜伏膜蛋白1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Slug 锌指转录因子SlugMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-rabbit IgG/PE PE标记的羊抗兔IgG 规格 0.1ml

AQP-1(Mouse Aquaporin 1) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白1 96T

NAT8L 英文名称： N-乙酰转移酶8样蛋白 0.2ml

CHMP2B 英文名称： 染色质修饰蛋白2B 0.2ml

Anti-Phospho-p73 (Tyr99) 磷酸化P73抑制基因Multi-class antibodies规格： 0.1ml

HSP-90(Human Heat Shock Protein 90) ELISA Kit 人热休克蛋白90Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-PACAP R1/VIP receptor-I 腺苷酸环化酶激活肽受体-IMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh HRAS+KRAS 转化蛋白p21(原癌基因H-ras) 规格 0.2ml

LIFR ELISA Kit 大鼠抑制因子受体 96T

PHAP1 英文名称： 蛋白磷酸酶2A抑制剂1 0.2ml