PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

小孢拟盘多毛孢PTPRJ (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type J) ELISA Kit拉丁属名: Pestalotiopsis microspora

枯草芽孢杆菌PDGFRβ (Platelet Derived Growth Factor Receptor Beta) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

皱褶假丝酵母GHITM (Growth Hormone Inducible Transmembrane Protein) ELISA Kit拉丁属名: Candida rugosa

米曲霉ELA2B (Elastase 2B) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  oryzae

杰丁塞伯林德纳氏酵母α-GST (α-glutathione S-transferases) ELISA Kit拉丁属名: Cyberlindnera jadini

拟卵盖鹅膏菌COL8α1 (Collagen Type VIII Alpha 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

桃叶点霉CA4 (Carbonic Anhydrase IV) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

帚霉CHD3 (Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

根瘤菌LAP (Leucine Aminopeptidase) ELISA Kit用途: 固氮

新疆盐地杆菌TU3A (TU3A Protein) ELISA Kit拉丁属名: Salinibacterium  xinjiangense

盐古杆菌MIP-1α (Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Natrinema sp.

红色雷夫松氏菌GDNF (Glial Cell Line Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit拉丁属名: Leifsonia  rubra

大肠埃希菌APT (Abnormal Prothrombin) ELISA Kit拉丁属名: coli

旋丝毛壳αFP (Alpha-Fetoprotein) ELISA Kit拉丁属名: Chaetomium bostrychodes

酒质安全快检箱 (清单见备注)RNASET2 (Ribonuclease T2) ELISA Kit 规格: JC-2型
鸡探针法荧光定量PCR试剂盒供应商C21orf69 英文名称： 21号染色体开放阅读框69 0.2ml

Anti-CCR-2/5/CD192 细胞表面趋化因子受体2/5Multi-class antibodies规格： 0.1ml

IASPP(inhibitory member of the ASPP family) 细胞凋亡ASPP家族的另一个成员(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Integrin beta 2/CD18/LFA-1 整合素β2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh PANK3 泛酸激酶3 规格 0.2ml

F7 Kit Mouse 小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 ELISA配对 ELISA

TNFSF14 英文名称： 坏死因子配体超家族成员14 0.1ml

CACNA2 英文名称： 钙通道L型α2多肽 0.2ml

Anti-PAI-2 纤溶酶原激活物抑制因子2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

TH(Human tyrosine hydroxylase) ELISA Kit 人酪氨酸羟化酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NFKB p52/NF-κB2 p100 细胞核因子/k基因结合核因子 p52/p100Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IL-1R1/CD121a/IL1 Receptor I 白介素1受体1 规格 0.1ml

LEP ELISA kit 大鼠瘦素 96T

Phospho-PLC gamma 1(Tyr775) 英文名称： 磷酸化磷酯酶Cγ1 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-c-Abl(Tyr134) 磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl 规格 0.1ml

Triton-X100 100ml 进口分装

Vimentin 英文名称： 波形蛋白 0.1ml

phospho-DOK1 (Tyr398) 英文名称： 磷酸化D酪酸激酶衰减蛋白1 0.1ml

Anti-phospho-ALK/CD246(Tyr1586) 磷酸化间变型激酶Multi-class antibodies规格： 0.1ml

phospho-eIF4EBP1 (Ser64) 英文名称： 磷酸化4E结合蛋白1 0.1ml

鼠抗合胞病毒单克隆 anti-RSV 0.1ml

CHK1 英文名称： 细胞周期检测点激酶1 0.2ml

Anti-IL-10RA 白细胞介素-10受体aMulti-class antibodies规格： 0.2ml

OVA sIgE(Human ovalbumin specific IgE) ELISA Kit 人卵清蛋白特异性IgEMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-IGF II/IGF2 胰岛素样生长因子-IIMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MAGEL2 抗原样基因2 规格 0.2ml

Human Resistin ELISA KIT 人抵抗素 96T

RERG 英文名称： Ras相关雌激素调节生长抑制蛋白 0.2ml