PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

蜡样芽孢杆菌PLD2 (Phospholipase D2) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  cereus

棱柱散尾菌中华变型PIGR/SC (Polymeric Immunoglobulin Receptor/Membrane Secretory Component) ELISA Kit用途: 药用

植物乳杆菌MYC (V-Myc Myelocytomatosis Viral Oncogene Homolog) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  plantarum

*美味牛肝菌EXT1 (Exostoses 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌MT (Melatonin) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

产朊假丝酵母MLCK/MYLK (Myosin Light Chain Kinase) ELISA Kit拉丁属名: Candida utilis

水栖黄杆菌FBN3 (Fibrillin 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

直丝紫链霉菌cPLA2 (Cytosolic Phospholipase A2) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces rectiviolaceus

脂肪杆菌PTGS1 (Prostaglandin Endoperoxide Synthase 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

季也蒙假丝酵母果生变种15-LO (Arachidonate 15-Lipoxygenase) ELISA Kit拉丁属名: Candida  guilliermondii var. carpophila

西弗冠孢酵母RXFP1 (Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

德氏乳杆菌MAPτ (Microtubule Associated Protein Tau/Tau Protein) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  delbrueckii

小单孢菌MPIF2 (Myeloid Progenitor Inhibitory Factor 2) ELISA Kit用途: 代谢产物具有抗菌活性。

鼠李糖乳杆菌NADPH (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus rhamnosus

嗜乙酰乙酸棒杆菌PK (Pyruvate Kinase, Liver And RBC) ELISA Kit 拉丁属名: Corynebacterium  acetoacidophilum
美人鱼发光杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Arginase II 英文名称： 精酸酶2 0.1ml

Anti-Aryl Hydrocarbon Receptor/FITC 荧光素标记芳香烃受体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Mouse serine/threonine protein kinase,STK ELISA Kit 小鼠丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Bim(phospho Ser87)/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化细胞死亡调解子IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh ERAB/HSD17B10 内质网Aβ相关结合蛋白 规格 0.1ml

sCD28(human soluble cluster of differentiation 28) ELISA Kit 人可溶性CD28 96T

MMP-2 英文名称： 基质金属蛋白酶-2 0.1ml

CACNA1F 英文名称： 钙离子通道a1F亚型 0.1ml

Anti-NUMB 膜相关蛋白NumbMulti-class antibodies规格： 0.2ml

HBV preS2Ab(Human hepatitis B virus) ELISA Kit 人病毒前S2Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-KLK10 激肽释放酶10Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Laminin B2 gamma 1 层粘连蛋白B2γ1 规格 0.1ml

BDNF ELISA Kit 大鼠脑源性神经营养因子 96T

PAR4 英文名称： 蛋白酶激活受体4 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-CAMK2G (Ter286) 磷酸化钙/钙调素依赖蛋白激酶CAMK2G 规格 0.1ml

酸性磷酸酶的阻断剂 10ml Sigma原料

VMAT2 英文名称： 脑单胺类神经递质转运蛋白 0.2ml

DSCC1 英文名称： DSCC1蛋白 0.2ml

Anti-Aggrecan2/ADAMTS-5 软骨蛋白聚糖Multi-class antibodies规格： 0.2ml

EPCR 英文名称： 内皮细胞活化蛋白受体 0.2ml

细胞表面趋化因子受体2/5 Anti-CCR-2/5 0.1ml

Chimaerin 2 英文名称： 嵌合蛋白2/β2-chimaerin 0.1ml

Anti-HBA1/Alpha globin 血红蛋白α1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

IL-11(Human Interleukin 11) ELISA KIT 人白介素11Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-GRK1 G蛋白偶合受体激酶1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MOG 髓鞘少树突胶质细胞糖蛋白 规格 0.1ml

GTE-AGE(Human Glomerular tissue extract-advanced glycosylation end products) ELISA Kit 人肾小球组织糖基化终末产物 96T

Rho GTPase activating protein 29 英文名称： Rho GTP酶激活蛋白29 0.2ml