PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

抗生链霉菌FBLN5 (Fibulin 5) ELISA Kit用途: 拮抗菌

生黄色链霉菌MMP-10 (Matrix Metalloproteinase 10) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces chromoflavus

米曲霉PF4 (Platelet Factor 4) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  oryzae

鲍姆桑黄GPIIb/IIIa (Platelet Membrane Glycoprotein IIb/IIIa) ELISA Kit拉丁属名: Sanghuangporus baumii

平脐蠕孢菌SSFA2 (Sperm Specific Antigen 2) ELISA Kit 用途: 研究

亮白曲霉UPP2 (Uridine Phosphorylase 2) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus candidus Link

罗尔夫青霉T4 (Thyroxine) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium rolfsii

扣囊复膜孢酵母GHRH (Growth Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomycopsis fibuligera

拟棒形节丛孢HSF1 (Heat Shock Transcription Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Arthrobotrys pseudoclavata

柱隔孢菌PIIINP (N-Terminal Procollagen Ⅲ Propeptide) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

克鲁斯假丝酵母IGFBP-7 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 7) ELISA Kit拉丁属名: Candida  krusei

大肠埃希氏杆菌 PSAP (Prosaposin) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia  coli

樟疫霉NUP160 (Nucleoporin 160kDa) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

克雷伯氏菌属PROC (Protein C) ELISA Kit拉丁属名: Klebsiella sp.

枯草芽胞杆菌PYY (Peptide YY) ELISA Kit用途: 分类 研究
奥尔森派琴虫探针法荧光定量PCR试剂盒规格转移生长因子–β受体2 Anti-TGF-βR 2 0.1ml

SHFM3 英文名称： SHFM3蛋白 0.2ml

Yellow fever virus envelope glycoprotein E 英文名称： 黄热病毒包膜糖蛋白 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-LATS1 (Ser909) 磷酸化抑制基因LATS1 规格 0.1ml

OGP (Ostegenic Growth Peptide) 成骨生长肽 (骨生长激素肽)(蛋白多肽)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

EphB6 英文名称： 酪酸蛋白激酶受体B6 0.1ml

包含氧化还原酶的WW域 Anti-WWOX 0.1ml

CABP5 英文名称： 钙结合蛋白5/3 0.2ml

Anti-Phospho-eIF2 alpha (Ser51) 磷酸化真核启动因子2αMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Bcl-2 大鼠Bcl-2Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-p56Dok2(Tyr351) 磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Nck1/NCK alpha NCK衔接蛋白1 规格 0.2ml

Human anti-thrombin receptor,ATR ELISA Kit 人抗凝血酶受体 96T

S100B 英文名称： S100B蛋白 0.1ml

Anti-Calpain 2 钙激活的中性蛋白酶2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh PDGFRA 血小板源性生长因子受体A(PDGFRα) 规格 0.1ml

Apolipoprotein D 浓缩液 0.1ml 进口分装

TRAIL 英文名称： 坏死因子相关凋亡诱导配体 0.1ml

CEA 英文名称： 癌胚抗原 0.1ml

Anti-Calpain 2 钙激活的中性蛋白酶2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

小鼠转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒英文名称：Mouse transforming growth factor α,TGF-α ELISA Kit进口/原装

Chicken IgY 英文名称： 兔抗鸡IgY 1mg

Anti-GATA-5 GATA结合蛋白5Multi-class antibodies规格： 0.2ml

APF(Human anti-perinuclear factor) ELISA Kit 人抗核周因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-IL-28A/IFNL2 白细胞介素28AMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh LRRC41 LRRC41蛋白 规格 0.2ml

HA(Human hemagglutinin) ELISA Kit 人血凝素 96T

Phospho-Rb (Thr826) 英文名称： 磷酸化视网膜母细胞瘤相关蛋白1 0.1ml