PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

PrauserellaPCP (Procollagen C Peptidase)ELISA Kit拉丁属名: Prauserella salsuginis sp

蜡状芽孢杆菌NUP50 (Nucleoporin 50kDa) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus cereus

贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型TCR (Tcell Receptor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

少根根霉AChE (Acetylcholinesterase) ELISA Kit拉丁属名: Rhzopus arrhizus Fisher

钦海特德沃斯氏菌pig GDF6 (Growth Differentiation Factor 6) ELISA Kit 拉丁属名: Devosia chinhatensis

谷氨酸棒杆菌CKLFSF8 (Chemokine Like Factor Superfamily 8) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

包围漆斑菌MUC1 (Mucin 1) ELISA Kit拉丁属名: Striaticonidium cinctum

巨大球菌属Aβ1-42 (Amyloid Beta Peptide 1-42) ELISA Kit拉丁属名: Macrococcus sp.

康氏假单胞菌fFDFT1 (Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas costantinii

硬水黄杆菌NT-ProANP (N-Terminal Pro Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit 拉丁属名: Flavobacterium  aquidurense

不动杆菌NTRK2 (Neurotrophic Tyrosine Kinase Receptor Type 2 ) ELISA Kit 拉丁属名: Acinetobacter sp.

动物双歧杆菌乳亚种MAG Ab (Anti-Myelin Associated Glycoprotein Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Bifidobacterium  animalis subsp. lactis

黄硬皮马勃GTF2B (General Transcription Factor IIB) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

猪布鲁氏菌TSP-1 (Thrombospondin-1) ELISA Kit拉丁属名: suis

固氮菌ON (Osteonectin) ELISA Kit 用途: 固氮。
纯绿青霉探针法荧光定量PCR试剂盒规格人细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA试剂盒 英文名称：Human Surface Membrane Immunoglobulin，SmIg ELISA Kit进口/分装

人细胞绒毛蛋白/埃兹蛋白(CVL)ELISA试剂盒英文名称：Human cytovillin/ezrin,CVL ELISA Kit特价促销

人细胞色素b561(cytb561)ELISA试剂盒英文名称：Human lipocalin 2,LCN2 ELISA Kit进口/分装

PAR4 (protease-activated receptor 4) 蛋白酶活化受体4/细胞凋亡反应蛋白4抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-ATF3 活化转录因子3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-APC6/CDC16(Ser560) 磷酸化细胞分裂周期蛋白16 规格 0.1ml

Ras 浓缩液 0.1ml 进口分装

c-Abl 英文名称： 非受体酪酸激酶c-Abl 0.1ml

Anti-N-Ras 原癌基因Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Apo-E(Human Apolipoprotein E) ELISA Kit 人载脂蛋白EMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-HCMV UL49 人巨细胞病毒UL49蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh KAT13A/SRC1 类固醇受体激活蛋白1 规格 0.2ml

Human Amebiasis ELISA Kit 人阿米巴 96T

PP14 英文名称： 胎盘蛋白14 0.1ml

吉姆萨染色液 10ml Sigma原料

VDAC 英文名称： 等电压依赖性阴离子通道 0.2ml

Dynamin 1 英文名称： 酶动力蛋白1 0.1ml

Anti-ADAMTS12 整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-12Multi-class antibodies规格： 0.2ml

DERLIN-1 英文名称： 细胞膜蛋白Derlin 0.2ml

组织紧张素Ⅱ1型受体 Anti-Agtr1/AT1a 0.1ml

Anti-XBP-1/FITC 荧光素标记细胞核转录因子X盒结合蛋白IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

CHES1 英文名称： CHES1蛋白 0.1ml

Anti-HBsAg 人表面抗原单克隆(检测)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

NP-Y(Human neuropeptide Y) ELISA Kit 人神经肽YMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-HBcAg 人核心抗原单克隆Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mkl1/MRTF-A myocardin相关转录因子 规格 0.2ml

PP(Human Pepsin) ELISA Kit 人胃蛋白酶 96T

RAR alpha 英文名称： 维受体RAR α/RAR α 0.1ml