PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

皱孢链霉菌RNASEN (Ribonuclease III, Nuclear) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces scabrisporus

普通变形杆菌MRP1 (Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: vulgaris

哈茨木霉PDGF-AB (Platelet Derived Growth Factor AB) ELISA Kit 拉丁属名: Trichoderma  harzianum

紫红曲霉ACA-IgM (Anti-Cardiolipin Antibody IgM) ELISA Kit拉丁属名: Monascus purpureus

环带拟盘多毛孢CG (Chorionic Gonadotropin) ELISA Kit拉丁属名: Pestalotiopsis zonata

桔青霉TGM1 (Transglutaminase 1, Keratinocyte) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium  citrinum

嗜松青霉Try2 (Trypsinogen II) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium pinophilum

薄花边伞2-1CABIN1 (Calcineurin Binding Protein 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

扩展青霉ADAM9 (A Disintegrin And Metalloprotease 9) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium  expansum

镰刀菌ATXN2 (Ataxin 2) ELISA Kit 用途: 教学科研

串珠镰刀菌*PRKAα1 (Protein Kinase, AMP Activated Alpha 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

烟酸芽孢杆菌MUC13 (Mucin 13) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus niacini Nagel and Andreesen

酿酒酵母NP (Nandrolone Phenylpropionate) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

淡黄湿伞CDNF (Cerebral Dopamine Neurotrophic Factor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

球孢枝孢CDT (Carbohydrate Deficient Transferrin) ELISA Kit拉丁属名: Cladosporium  sphaerospermum
巴斯德氏杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒供应商ADORA1 英文名称： 腺苷A1A受体 0.2ml

Anti-CD272/BTLA/FITC 荧光素标记B和T淋巴细胞衰减蛋白IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

RANTES/CCL5 ELISA kit 大鼠正常T细胞表达和分泌因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-AMPK beta-1(phospho Ser108) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FASN/Fatty Acid Synthase 1 脂肪酸合成酶 规格 0.1ml

IL1Ra ELISA Kit 大鼠白介素1受体拮抗剂 96T

MHC Class II 英文名称： 组织相容性复合体β 0.1ml

CA I 英文名称： 碳酸酐酶1 0.2ml

Anti-NGB 脑红蛋白/神红蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

IgH(Human immunoglobulin heavy chain) ELISA Kit 人免疫球蛋白重链Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340) 磷酸化原癌基因c-RafMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HAGHL 羟基酰谷胱甘肽水解酶样蛋白 规格 0.2ml

HSP-40 ELISA Kit 大鼠热休克蛋白40 96T

p53R2 英文名称： 核苷酸还原酶M2B 0.1ml

EpCAM 英文名称： 上皮特异性抗原 0.1ml

信号转导和转录激活因子2 Anti-STAT2 0.2ml

anti-Rarres2/TIG2/FITC 荧光素标记视黄酸受体应答蛋白2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-MAP2 (Thr1620/1623) 磷酸化微管相关蛋白2 规格 0.1ml

Nociceptin receptor 孤菲肽受体(痛敏肽受体)(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒英文名称：Human C-telopeptide of type Ⅰ collagen，CTX-Ⅰ ELISA Kit特价促销

人Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)ELISA试剂盒 英文名称：Human cross linked N-telopeptide of type Ⅰ collagen，NTX ELISA Kit特价供应

CHCHD3 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD3 0.1ml

Anti-Beta-HCG 人β亚基人绒毛膜激素Multi-class antibodies规格： 0.1ml

MTL(Human Motilin) ELISA Kit 人活性肠肽Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-ICAD/DFF-45 Beta Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MAP-9 微管相关蛋白9 规格 0.2ml

DPYSL3(Human dihydropyrimidinase-like 3) ELISA Kit 人二氢嘧啶酶样3 96T

RNF213 英文名称： 环指蛋白213 0.1ml