PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

根瘤菌TSLP (Thymic Stromal Lymphopoietin) ELISA Kit 用途: 固氮

酿酒酵母GHAb (Anti-Growth Hormone Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

土星汉逊酵母NUP153 (Nucleoporin 153kDa) ELISA Kit拉丁属名: Hansenula saturnus

杂硅盐矿物节杆菌GLUT2 (Glucose Transporter 2) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter   siccitolerans

粉红聚端孢BMG/β2-MG (Beta-2-Microglobulin) ELISA Kit用途: 进行分析检测及抗病性鉴定，指导 。

消毒灯辐照强度指示卡SEMA3B (Semaphorin 3B) ELISA Kit规格: 50片

酿酒酵母HNRPA2B1 (Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein A2/B1) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

B1速测卡 GDF15 (Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit 规格: 5次测定用量/盒

新疆盐地杆菌EMMPRIN/CD147 (Extracellular Matrix Metalloproteinase Inducer) ELISA Kit拉丁属名: Salinibacterium  xinjianggense

扩展青霉PACAPR (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide Receptor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium expansum

酮丁梭菌OGP (Osteogenic Growth Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Clostridium  acetobutylicum

红色蜡蘑LFA-3 (Lymphocyte Function Associated Antigen 3) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

侧孢短芽孢杆菌PLC (Phospholipase C) ELISA Kit拉丁属名: Brevibacillus laterosporus

大肠杆菌PS (Plasma Anticoagulant Protein S) ELISA Kit用途: 具有启动子功能的Ps6片段的核苷酸序列Ps6片段中G+C为40.53%，A+T为59.47%

胶孢NF-κB p65 (Nuclear Factor-κB p65) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
细小病毒19探针法荧光定量PCR试剂盒 Anti-COX IV-1 细胞色素c氧化酶IV亚型1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

phospho-DNA PKcs (Thr2609) 英文名称： 磷酸化DNA依赖性蛋白激酶 0.1ml

禽脑脊髓炎病毒 Anti-AEV 0.1ml

Anti-AT1R/AGTR1/FITC 荧光素标记紧张素Ⅱ-1型受体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-FANCG (Ser383) 磷酸化DNA损伤修复基因XRCC9 规格 0.1ml

Cripto-1(N-Terminus) 衍化生长因子抗原(表皮生长因子相关肽)N端Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA 英文名称：Human trypsinogen activation peptide,TAP ELISA Kit特价促销

C9orf93 英文名称： 9号染色体开放阅读框93 0.2ml

Anti-PMP22 外周髓鞘蛋白-22Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Human Hypothetical protein LOC677168 ELISA Kit 人假定蛋白LOC677168Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-PAX9 配对盒基因9Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh HO-1 血红素氧合酶 1/热休克蛋白32 规格 0.1ml

sP-selectin ELISA Kit 大鼠可溶性P选择素 96T

PLEKHA7 英文名称： PLEKHA7蛋白 0.1ml

Caspase-12(hunman) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗原(人)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人抗70(SCL70/topoⅠ)ELISA试剂盒英文名称：Human anti-scl70 antibody,SCL70/topoⅠELISA Kit特价供应

人抗原提呈相关转运蛋白/T细胞活化蛋白(TAP)ELISA试剂盒英文名称：Human transporter associated with antigen processing,TAP ELISA Kit特价供应

人抗载脂蛋白A1(Apo A1)ELISA试剂盒 英文名称：Human anti-apolipoprotein A1 antibody，Apo A1 ELISA Kit特价供应

人抗增殖细胞核抗原(PCNA)ELISA试剂盒英文名称：Human proliferating cell nuclear antigen antibody,PCNA ELISA Kit特价供应

人抗着丝点(ACA/CENP)ELISA试剂盒英文名称：Human Anticentromere Antibody,ACA/CENP ELISA Kit特价促销

Pepsinogen C peptide 胃蛋白酶原C蛋白抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

ChAT 英文名称： ChAT胆碱乙酰转移酶 0.1ml

Anti-Phospho-NMDAR1 (Ser897) 磷酸化谷氨酸受体1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

PGE2(Human Prostaglandin E2) ELISA Kit 人素E2Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-EDG2/LPA1 溶血磷脂酸受体蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh KLHL11 Kelch样蛋白11 规格 0.2ml

PI Ab-IgG/IgM)ELISA Kit 大鼠磷脂酰肌醇IgG/IgM 96T

PTP4A2 英文名称： 肝再生磷酸酯酶2 0.2ml