PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

克雷伯氏菌REG3α (Regenerating Islet Derived Protein 3 Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Klebsiella pneumoniae

多粘类芽胞杆菌Flt3 (FMS Like Tyrosine Kinase 3) ELISA Kit用途: 产β-淀粉酶

间座壳属BCAN (Brevican) ELISA Kit 拉丁属名: Diaporthe sp.

白地霉MMP-24 (Matrix Metalloproteinase 24) ELISA Kit 拉丁属名: Geotrichum  candidum

plenti sgRNA(MS2)_puro(Plasmid#73795)pSAMca089-p FUGW-U6-BsmBl-sg RNA009-EF1α-Puro-WPREMMP-25 (Matrix Metalloproteinase 25) ELISA Kit拉丁属名: 宿主：DH5α，BL21

酿酒酵母CAPA (Cytotoxin Associated Protein A) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

壮观丝衣霉VEGF-D (Vascular Endothelial Growth Factor D) ELISA Kit 拉丁属名: Byssochlamys spectabilis

蛛丝细薄菌CYP7A1 (Cytochrome P450 7A1) ELISA Kit 拉丁属名: Athelia arachnoidea

高山被孢霉CFH (Complement Factor H) ELISA Kit拉丁属名: Mortierella alpina

海床游动微菌TPA (Tissue Polypeptide Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Planomicrobium okeanokoites

蜡状芽孢杆菌HJV/HFE2 (Hemojuvelin/Hemochromatosis Type 2) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  cereus

大肠杆菌SDF2L1 (Stromal Cell Derived Factor 2 Like Protein 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑腐皮壳菌GAP (GTPase Activating Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

印度洋硝酸盐还原菌Arg (Arginase) ELISA Kit拉丁属名: Nitratireductor indicus

肯彭贪铜菌FABP5 (Fatty Acid Binding Protein 5, Epidermal ) ELISA Kit拉丁属名: Cupriavidus campinensis
(同病毒)绵羊病毒探针法荧光定量PCR试剂盒规格ATRN 英文名称： 吸引素 0.2ml

Anti-SLAMF9/CD2F-10/FITC 荧光素标记CD2F-10IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

P-Selectin/CD62P(Mouse P-Selectin) ELISA kit 小鼠P选择素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CD7/FITC 荧光素标记抗CD7IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh E3 ubiquitin ligase/RNF218 E3泛素连接酶 规格 0.2ml

MU IgG 病毒 IgG(间接法二步法)

Mitofusin 2 英文名称： 线粒体融合蛋白Mfn2 0.1ml

C9orf7 英文名称： 9号染色体开放阅读框7 0.2ml

Anti-Phospho-PLC gamma 1 (Tyr771) 磷酸化磷酯酶Cγ1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

ES-Ab(Human anti-Endostatin antibody) ELISA Kit 人内皮抑素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-P53 (Ser392) 磷酸化抑制基因P53Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HSP71 热休克蛋白71 规格 0.1ml

HD(Mouse Histone Deacetylase)ELISA Kit 小鼠组织蛋白去乙酰化酶 96T

PAK1 英文名称： p21激活激酶1 0.1ml

人甘露糖(MN)ELISA试剂盒 英文名称：Human Mannose，MN ELISA Kit进口/原装

人甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素(MBP/MBL)ELISA试剂盒 英文名称：Human Mannma binding protein/mannan binding lectin,MBP/MBL ELISA Kit进口/原装

人甘露糖凝集素受体(MBLR)ELISA试剂盒 英文名称：Human Mannma binding lectin receptor,MBLR ELISA Kit特价促销

人甘露糖受体(MR)ELISA试剂盒 英文名称：Human mannose receptor，MR ELISA Kit特价促销

NAP1 (nucleosome assembly protein 1) 核小体组装蛋白1(多肽)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Apelin 脂肪因子ApelinMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Bad(Ser118) 磷酸化相关死亡促进因子 规格 0.1ml

CGK2 英文名称： cGMP依赖性蛋白激酶2 0.1ml

Anti-HCV-Core 病毒-C区Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Human P27 protein ELISA Kit 人P27蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-HCG Alpha 人绒毛膜激素α亚基Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MIP4/CCL18 巨噬细胞蛋白18 规格 0.1ml

MLCK(Human myosin light chain kinase) ELISA Kit 人肌球蛋白轻链激酶 96T

RBM20 英文名称： RNA结合蛋白20 0.1ml