PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

微白黄链霉菌COL7 (Collagen Type VII) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces albidoflavus

细极链格孢HP (Haptoglobin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

米根霉LH (Luteinizing Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus oryzae

三棱孢小囊菌PDXK (Pyridoxal Kinase) ELISA Kit拉丁属名: Microascus trigonosporus

沙福芽孢杆菌OPN (Osteopontin) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus safensis

粘质皮状新丝孢酵母TDT (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase) ELISA Kit拉丁属名: Cutaneotrichosporon mucoides

荧光假单胞菌RUNX2 (Runt-Related Transcription Factor 2) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas fluorescens

枯草芽孢杆菌PC/CPG (Choline Phosphoglyceride) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

泡盛曲霉HNRPU (Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein U) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus awamori Nakazawa

灰锈赤链霉菌PKCθ (Protein Kinase C Theta )ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces griseorubiginosus

酿酒酵母LIF (Leukemia Inhibitory Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

野别样希瓦氏菌ET-1 (Endothelin 1) ELISA Kit拉丁属名: Alishewanella agri

科贝特氏菌属RAPGEF1 (Rap Guanine Nucleotide Exchange Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Cobetia  crustatorum

红色红菇EM2 (Endomorphin 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

青紫链霉菌CNR1 (Cannabinoid Receptor 1, Brain) ELISA Kit 拉丁属名: Syntrophomonas glaucoviolaceus
奥斯特线虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒 DCTN6 英文名称： 动力蛋白激活蛋白6 0.2ml

EPHB4 EphB4 兔单抗 (PE) Human

EGFR 英文名称： 表皮生长因子受体 0.1ml

磷脂酰肌醇激酶 Anti-PI3K/P85 alpha 0.1ml

Anti-Phospho-Stat2 (Tyr690)/FITC 荧光素标记磷酸化信号转导和转录激活因子2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MYL9(Thr19) 磷酸化肌球蛋白轻链9 规格 0.1ml

Ang- II (Angiotensin II ) 紧张素II抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

C9orf61 英文名称： 9号染色体开放阅读框61 0.2ml

Anti-sFRP-4 子宫内膜Multi-class antibodies规格： 0.2ml

sTNF Alpha-RII(humen) 大鼠可溶性坏死因子-受体2Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-DTNBP1 易感基因Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NBL1/DAND1 神经母细胞瘤抑瘤蛋白1 规格 0.1ml

Human Complement fragment 3a,C3a ELISA Kit 人补体片断3a 96T

SMAGP 英文名称： 小细胞跨膜糖化蛋白 0.1ml

兔过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit Peroxisome Proliferator-activated receptor γ,PPAR-γ ELISA Kit 特价促销

Snake poison Protein 蛇毒蛋白Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CD272/BTLA B和T淋巴细胞衰减蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PAK1 p21激活激酶1 规格 0.1ml

AGT Kit Human 人 Angiotensinogen / SerpinA8 / AGT ELISA配对 ELISA

TTC33 英文名称： TTC33蛋白 0.2ml

C6orf58 英文名称： 6号染色体开放阅读框58 0.2ml

c-fos 英文名称： c-fos 0.1ml

Anti-Plexin B1 神经丛蛋白B1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

OxLDL(Human oxidized lowdensity lipoprotein) ELISA Kit 人氧化Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-MMP-24 基质金属蛋白酶-24Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Integrin beta 7 整合素β7 规格 0.1ml

anti-HAV(Human anti-hepatitis A virus IgM antibody) ELISA Kit 人IgM 96T

PIBF1 英文名称： 孕酮诱导阻断因子1 0.2ml