PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

仁果壳小圆孢菌ANXA5 (Annexin A5) ELISA Kit用途: 植物病原物，为该病防治提供依据

嗜热脂肪地芽孢杆菌ALDOC (Aldolase C, Fructose Bisphosphate) ELISA Kit拉丁属名: Geobacillus  stearothermophilus

耐寒短杆菌TP/TXA2R (Thromboxane Receptor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉SHBG (Sex Hormone Binding Globulin) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus niger

西宫皮生球菌C4BP (C4 Binding Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Dermacoccus nishinomiyaensis

阿魏侧耳M-AChR M3 (Muscarinic Acetylcholine Receptor M3) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌PRELP (Proline Arginine Rich End Leucine Rich Repeat Protein) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

苏云金芽孢杆菌AGA (Anti-Glycolipid Antibody) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

佛雷德里克斯堡假单胞菌ODC (Ornithine Decarboxylase) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas  frederiksbergensis

极单胞菌属PC/CPG (Choline Phosphoglyceride) ELISA Kit拉丁属名: Polaromonas  vacuolata

灰略红链霉菌RND1 (Rho Family GTPase 1) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces griseorubens

大肠埃希氏菌IGF1R (Insulin Like Growth Factor 1 Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

草菇TFR/CD71 (Transferrin Receptor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

秃裸链霉菌EFNA4 (Ephrin A4) ELISA Kit 用途: 产生代谢产物具有抑菌活性

ActinokineosporaTFF2 (Trefoil Factor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Actinokineospora sp.
海鱼分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格PSMD6/P44S10  蛋白酶调解因子6抗体柯托苷(2,6-Dihydroxy-4-methoxyphenyl)phenylmethanone对照药材 分 子 式: C14H12O4 分 子 量: 244.24268

OCEL1  紧密连接蛋白/小分子胶原蛋白OCEL1抗体黑介子苷b-D-Glucopyranose, 1-thio-,1-[N-(sulfooxy)-3-butenimidate], potassium salt (1:1)中药标准品  分 子 式: C10H16NO9S2-.K+ 分 子 量: 397.46364

ODF3B  外致密纤维蛋白3B抗体乙酸盐缓冲液(0.05mol/L,pH5.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PGBD1/Cerebral protein 4  脑蛋白4抗体野甘草属醇1-Naphthalenemethanol,8-(benzoyloxy)- decahydro-5-[(3E)-5-hydroxy-3-methyl-3- pentenyl]-1,4a-dimethyl-6-methylene-,(1R,- 4aR,5S,8R,8aR)- 对照药材 分 子 式:  分 子 量:

PGBD3  PGBD3蛋白抗体灵芝萜酮二醇Lanosta-7,9(11)-dien-3-one,24,25-dihydroxy-, (24S)-化学标准品 分 子 式: C30H48O3 分 子 量: 456.70032

PGGT1β  香叶烯基转移酶1β抗体汉黄芩素Wogonin中药标准品  分 子 式: C16H12O5 分 子 量: 284.26348

MYCBP2  MYC结合蛋白2抗体杨梅素3,5,7-Trihydroxy-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)-4H-chromen-4-one中药标准品  分 子 式: C15H10O8 分 子 量: 318.2351