PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

平菇GPX1 (Glutathione Peroxidase 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

根际假单胞菌EAR3 (Eosinophil Associated Ribonuclease A family Member 3) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas   rhizosphaerae

地衣芽胞杆菌PHC (Primary Hepatic Carcinoma)ELISA Kit用途: 耐高温淀粉酶

宇佐美曲霉NUMA1 (Nuclear Mitotic Apparatus Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus usamii Sakaguchi et al

黄曲霉PKM2 (Pyruvate Kinase, Muscle) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus flavus

生孢梭菌COL7 (Collagen Type VII) ELISA Kit 拉丁属名: Clostridium sporogenes

东京根霉ALCAM (Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus  tonkinensis

金顶侧耳FBL (Fibrillarin) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

谷氨酸棒杆菌TDT (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

淡紫青链霉菌A-CoA (Acetyl Coenzyme A) ELISA Kit用途: 分类 研究

亚罗克鲁维酵母TXLNb (Taxilin Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Kluyveromyces yarrowii

费氏中华根瘤菌NF (Neurofilament) ELISA Kit用途: 产酸，能与我国栽培大豆共生固氮

烟草疫霉OCT4 (Octamer Binding Transcription Factor 4) ELISA Kit拉丁属名: Phytophthora nicotianae

堀越氏芽孢杆菌snRNP/Sm (Small Nuclear Ribonucleoprotein) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus horikoshii

类芽孢杆菌FABP4 (Fatty Acid-binding Protein 4, Adipocyte) ELISA Kit拉丁属名: Paenibacillus sp.
禽结核分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格BECN1L1  Bcl-2同源结构域样蛋白1抗体异紫花前胡内酯Marmesin中药标准品  分 子 式: C14H14O4 分 子 量: 246.25856

BEND5  BEN结构域蛋白5抗体牛磺鹅脱氧胆酸钠盐Sodium taurochenodeoxycholate化学标准品 分 子 式: C26H44NNaO6S 分 子 量: 521.68

phospho-IRF3(Ser386)  磷酸化干扰素调节因子3抗体甲基小檗碱中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

RNF187  环指蛋白187抗体风信子素(2-(1-Ethoxyethoxy)ethyl)benzene中药标准品  分 子 式: C12H18O2 分 子 量: 194.27012

PACRG  麻疯病和共同调节蛋白抗体半齿泽兰素色烯Ethanone,1-(7-hydroxy-2,2-dimethyl-2H-1- benzopyran-6-yl)- 对照药材 分 子 式: C13H14O3 分 子 量: 218.24846

PJA2/RNF131  环指蛋白131抗体蕨内酰胺Pterolactam对照药材 分 子 式: C5H9NO2 分 子 量: 115.13046

MUL1/RNF218  E3泛素连接酶MUL1抗体苍耳亭2H-Cyclohepta[b]furan-2-one,3,3a,4,7,8,8a-hexahydro-7-methyl-3-methylene-6-(3-oxo-1-buten-1-yl)-,(3aR,7S,8aS)-中药标准品  分 子 式: C15H18O3 分 子 量: