PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

尖孢镰孢AAA (Anti-Albumin Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Fusarium oxysporum

CupriavidusTXB2 (Thromboxane B2) ELISA Kit拉丁属名: Cupriavidus gilardii

栖土梭孢壳PDIA3 (Protein Disulfide Isomerase A3) ELISA Kit拉丁属名: Thielavia terricola

苏云金芽孢杆菌松躅亚种EPI (Epinephrine/Adrenaline) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus thuringiensis subsp. dendrolimus

矩圆黑盘孢ITLN1 (Intelectin 1/Omentin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

嗜麦芽糖寡养单胞菌ApoA1 (Apolipoprotein A1) ELISA Kit拉丁属名: Stenotrophomonas maltophilia

枯斑拟盘多毛孢Grb7 (Growth Factor Receptor Bound Protein 7) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

地衣芽胞杆菌GM-CSF Ab (Anti-Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor Antibody) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus licheniformis

环发仙菌VIPR1 (Vasoactive Intestinal Peptide Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Pilimelia anulata

拟无枝菌酸菌WARS (Tryptophanyl tRNA Synthetase) ELISA Kit拉丁属名: Amycolatopsis  sp.

产黄青霉CCNB (Cyclin-B) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium chrysogenum

费氏中华根瘤菌TRY (Trypsin) ELISA Kit 用途: 能在大豆上结瘤固氮，YMA培养基上生长速度快，产酸

聚多曲霉GKN1 (Gastrokine 1) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus sydowii

维氏气单胞菌CDK6 (Cyclin Dependent Kinase 6) ELISA Kit拉丁属名: Aeromonas veronii

塔宾曲霉ApoF (Apolipoprotein F) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus tubingensis
衣阿华支原体探针法荧光定量PCR试剂盒 NTAL  B淋巴细胞链接激活蛋白抗体

KRCC1  含赖氨酸卷曲螺旋蛋白1抗体

LACTB2  β内酰胺酶样蛋白2抗体

LAPTM4A  溶酶体相关膜蛋白4α抗体

LMBR1/DIF14  分化相关基因14抗体

VMAT2  脑单胺类神经递质转运蛋白抗体

Na+/K+-ATPase Alpha1  Na+/K+-ATPase α1 钠钾ATP酶α1多肽抗体