PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

球孢白僵菌TFF3 (Trefoil Factor 3, Intestinal ) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

芽孢杆菌属COL10 (Collagen Type X) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  sp.

木素木霉PAI2 (Plasminogen Activator Inhibitor 2 )ELISA Kit 拉丁属名: Trichoderma lignorum (Tode) Harz

绒边乳菇PIAS1 (Protein Inhibitor of Activated STAT 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

绛红产色小单胞菌EGR4 (Early Growth Response Protein 4) ELISA Kit 拉丁属名: Micromonospora purpureochromogenes

乳酸乳球菌乳亚种MYH1 (Myosin Heavy Chain 1, Skeletal Muscle, Adult) ELISA Kit拉丁属名: Lactococcus  lactis subsp. lactis

枯斑拟盘多毛孢ET-1 (Endothelin 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

石蕊杀菌素链霉菌PTGS1 (Prostaglandin Endoperoxide Synthase 1) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces litmocidini

日本裂殖酵母PAEP (Progestagen-Associated Endometrial Protein) ELISA Kit拉丁属名: Schizosaccharomyces japonicus

尖角凸脐蠕孢GZMK (Granzyme K) ELISA Kit用途: 研究

真姬菇ERCC1 (Excision Repair Cross Complementing Rodent Repair Deficiency Complementation 1) ELISA Kit拉丁属名: Hypsizigus  marmoreus

总状共头霉CCL1 (Chemokine C-C-Motif Ligand 1) ELISA Kit拉丁属名: Syncephalastrum  racemosum

球形芽孢杆菌PDGF-AB (Platelet Derived Growth Factor AB) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  sphaericus

固氮菌FCN1 (Ficolin 1) ELISA Kit用途: 固氮。

尖孢镰孢EL (EuglobulinLysis) ELISA Kit拉丁属名: Fusarium oxysporum
鸟分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒供应商RMND5B  RMND5B蛋白抗体β,β-二甲基丙烯酰紫草素β,β-Dimethylacrylshikonin化学标准品 分 子 式: C21H22O6 分 子 量: 370.39578

NNP1/RRP1 like protein  新型核蛋白质1抗体碳酸氢钠溶液(5.6%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

α-Adaptin  衔接蛋白α抗体3-邻甲基槲皮素2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-methoxy-4H-chromen-4-one对照药材 分 子 式: C16H12O7 分 子 量: 316.26228

SASS6  纺锤体组装异常蛋白6抗体12-羟基松香酸12-Hydroxyabietic acid对照药材 分 子 式:  分 子 量:

SPO11  减数分裂重组蛋白SPO11抗体9’’’-丹酚酸B单甲酯中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

STIL  中断位点蛋白STIL抗体苦参醇K化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

ARL8B  ADP核糖基化样因子8B抗体紫铆因2-Propen-1-one,1-(2,4-dihydroxyphenyl)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-, (2E)-对照药材 分 子 式: C15H12O5 分 子 量: 272.25278