PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

大肠埃希氏菌CA4 (Carbonic Anhydrase IV) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

琉球曲霉GTC (General Transcription Complex) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus luchuensis

近绿曲霉OTF2A (Octamer Transcription Factor 2A) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  subolivaceus

绿垂曲霉IFABP/FABP2 (Intestinal Fatty Acid Binding Protein) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus viridinutans

球毛壳CYFRA21-1 (Cytokeratin Fragment Antigen 21-1) ELISA Kit拉丁属名: Chaetomium globosum

直丝淡蓝褐链霉菌RARα (Retinoic Acid Receptor Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces coeruleofuscorectus

大肠埃希氏菌PS (Plasma Anticoagulant Protein S) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

单孢虫道酵母α Manase (α Mannosidase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

橘色硬皮马勃TCC C5b-9 (Terminal Complement Complex C5b-9) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

蛛网不显枝霉中华变种CDKN3 (Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 3) ELISA Kit拉丁属名: Aphanocladium aranearum var. sinense

需土节杆菌TF (Tissue Factor) ELISA Kit用途: 益生菌

葡萄球菌属BMP-15 (Bone Morphogenetic Protein 15) ELISA Kit 拉丁属名: Staphylococcus sp.

草假单胞菌FGF23 (Fibroblast Growth Factor 23) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  graminis

豌豆根瘤菌Sp100 (Sp100 Nuclear Antigen) ELISA Kit 用途: 共生固氮

沙漠奇异球菌ANG2 (Angiopoietin 2) ELISA Kit拉丁属名: Deinococcus deserti
马立克氏病病毒探针法荧光定量PCR试剂盒说明书TRPM3  瞬时受体电位离子通道蛋白3抗体（M亚家族）人参皂苷F4ginsenoside F4中药标准品  分 子 式: C42H70O12 分 子 量: 766.998

TRPM5  瞬时受体电位离子通道蛋白5抗体（M亚家族）L-苹果酸(S)-2-hydroxysuccinic acid化学标准品 分 子 式: C4H6O5 分 子 量: 134.08744

TRPM6  瞬时受体电位离子通道蛋白6抗体（M亚家族）1,8-桉叶素Cineole中药标准品  分 子 式: C10H18O 分 子 量: 154.25

TRPM1  瞬时受体电位离子通道蛋白1抗体（M亚家族）乙酸钠溶液(3mol/L,pH5.0,无菌)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

TRPM4  瞬时受体电位离子通道蛋白4抗体（M亚家族）五味子酯甲Schisantherin A中药标准品  分 子 式: C30H32O9 分 子 量: 536.56968

DIS3L  有丝分裂控制样蛋白DIS3L抗体突厥烯酮Damascenone中药标准品  分 子 式: C13H18O 分 子 量: 190.28142

DIS3L2  有丝分裂控制蛋白样DIS3L2抗体丙酮酸钠溶液(0.1mol/L,无菌)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: