PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

孟氏假单胞菌CFD (Complement Factor D) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  mandelii

产黄青霉PHLDA2 (Pleckstrin Homology Like Domain Family A, Member 2) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium chrysogenum

串珠镰孢TUBα3C (Tubulin Alpha 3c )ELISA Kit 用途: 产赤霉素

链霉菌ACTg1 (Actin Gamma 1) ELISA Kit用途: 产生代谢产物具有抑菌活性

毛栓孔菌TSGF (Tumor Specific Growth Facter/Tumor Supplied Group of Factor) ELISA Kit拉丁属名: Trametes hirsuta

济州极单胞菌PRDX5 (Peroxiredoxin 5) ELISA Kit拉丁属名: Polaromonas  jejuensis

伞枝犁头霉CSTA (Cystatin A)  ELISA Kit 拉丁属名: Absidia corymbifera

单孢共头霉多重生变种CYPD (Cyclophilin D) ELISA Kit 拉丁属名: Syncephalastrum monosporum var. pluriproliferum

刺孢吸水链霉菌APSA (Anti-Phosphatidyl Serine Antibody) ELISA Kit用途: 产正放线酮

鼠李糖乳杆菌TREM-1 (Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells-1) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  rhamnosus

林生地霉SOX2 (Sex Determining Region Y Box Protein 2) ELISA Kit 拉丁属名: Geotrichum silvicola

冻土毛霉BLNK (B-Cell Linker Protein) ELISA Kit拉丁属名: Mucor hiemalis

香菇GUK1 (Guanylate Kinase 1) ELISA Kit拉丁属名: Lentinula edodes

单色云芝ADIPOR1 (Adiponectin Receptor 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

Pedobacter sp.CRHBP (Corticotropin Releasing Hormone Bingding Protein) ELISA Kit拉丁属名: Pedobacter sp.
曼氏杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒探针法荧光定量PCR试剂盒规格DPP6  二肽基肽酶6抗体千金藤素Cepharanthine中药标准品  分 子 式: C37H38N2O6 分 子 量: 606.72

EFHA1  EFHA1蛋白抗体常规考马斯亮蓝染色洗脱液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SENP1  小泛素相关修饰蛋白1抗体富马酸fumaric acid中药标准品  分 子 式: C4H4O4 分 子 量: 116.07216

EFHC1  EFHC1蛋白抗体细胞核蛋白提取试剂盒标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

EFHC2  EFHC2蛋白抗体PLP固定液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

EFHD1  EFHD1蛋白抗体氯化天竺葵素-3,5-O-双葡萄糖苷PELARGONIN CHLORIDE化学标准品 分 子 式: C27H31O15+ 分 子 量: 595.52604

EF-CBP2  突触结合蛋白2抗体马兜铃内酰胺Benzo[f]-1,3-benzodioxolo[6,5,4-cd]indol-5(6H)-one,8-methoxy-中药标准品  分 子 式: C17H11NO4 分 子 量: 293.27354