PCR的反应条件：

因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。

◇ 循环次数

根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。

如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。

◇ Anneal以及Extension

合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。

产品特点：

◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；

◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；

◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，产品仅用于科研可同时进行多个检测；

◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

需要注意：
PCR反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）与热启动法（Hot Start Method）相结合，更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应，增强PCR扩增的特异性，能得到良好的PCR结果。

特点优势：

    1. 特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
    2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。

    3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。

    4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。

    5. 优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。

    6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。

使用方法：
注：产品仅用于科研所有试剂使用前需完全解冻，混合均匀，6,000rpm离心数秒后使用。

1.样本处理（样本处理区）

待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等，具体提取方法请参照相关说明书；阳性质控品及阴性质控品无需提取，可直接使用。

2. 扩增试剂准备（PCR前准备区）

取N个（N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品）PCR反应管，每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量，两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。

组分每头份用量FMD  RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。

1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s，转移至样本处理区。

2.加样（样本处理区）

3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl，盖紧管盖，于6,000rpm离心10s，转移至扩增区。

苏云金芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa拉丁属名: Bacillus thuringiensis Berliner

美澳型核果褐腐病菌Azotobacter chroococcum拉丁属名: Monilinia fructicola

谷氨酸棒状杆菌Enterococcus faecium拉丁属名: Corynebacterium glutamicum

*肉葡萄球菌Acetobacter aceti拉丁属名: Staphylococcus carnosus

康宁木霉Azotobacter chroococcum拉丁属名: Trichoderma  koningii

中国蜜环菌Micrococcus luteas注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉Enterobacter cloacae拉丁属名: Aspergillus  niger

哈氏弧菌Clostridium acetobutylicum拉丁属名: Vibrio harveyi

纤维化纤维微细菌Enterobacter cloacae用途: 分类、研究，具有 生物肥料潜力。

樟疫霉Micrococcus luteus注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

解脂亚罗酵母Micrococcus luteus拉丁属名: Yarrowia lipolytica

多形布勒担子酵母Micrococcus luteus拉丁属名: Bulleribasidium variabile

黑曲霉Corynebacterium gultamicum拉丁属名: Aspergillus niger van Tieghem

盐古杆菌Corynebacterium gultamicum拉丁属名: Natrinema  sp.

大肠埃希氏菌(大肠杆菌)Lactobacillus plantarum拉丁属名: Escherichia coli (Migula) Castellani et Chalmers

皮氏罗尔斯通氏菌Lactobacillus plantarum拉丁属名: Ralstonia  pickettii

极细链格孢Lactobacillus plantarum注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

产朊假丝酵母Corynebacterium gultamicum拉丁属名: Candida  utilis
木霉属通用PCR检测试剂盒现货葡萄糖铵发酵管BR20支，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，RT

中文名称： 葡萄糖铵发酵管

产品规格： BR

包装：20支