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人肾素(Renin)检测试剂盒(ELISA方法)操作程序
发表时间:2023-01-05
人肾素(Renin)检测试剂盒(ELISA方法)操作程序:
1.已稀释好的ABC和TMB显色液在加入酶标板孔前都应预先在37℃中平衡至少30分钟。试剂或样品稀释时,切不可忘记混匀。每次检测都应该做标准曲线。用户须估计样品待测因子的含量,决定适当的稀释倍数。
确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目,并增加1孔作为TMB空白显色孔。总数=样品数+9;做双份检测时×2。其余重包装好放入冰箱中。
2.将2000pg/ml,1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.2pg/ml的标准品各100μL依次加入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为零孔。对于人血清、血浆、尿液、细胞裂解液或细胞培养上清,直接加已用样品稀释液稀释的样品100μL。
3.酶标板加上封板膜,37℃反应90分钟。
4 .反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。不洗。
5.将准备好的生物素抗人renin抗体工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白显色孔除外)。
6.酶标板加上封板膜,37℃反应60分钟。
7.1X洗涤缓冲液洗涤3次,每次浸泡1分钟左右(每孔洗液至少300μL)。
8.将准备好的ABC工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白显色孔除外)。
9.酶标板加上封板膜,37℃反应30分钟。
10.1X洗涤缓冲液洗涤5次,每次浸泡1~2分钟左右(每孔洗液至少300μL)。
12.按每孔100μL依次加入终止液,此时蓝色立转黄色。
① 将TMB空白显色孔(只加TMB显色液和终止液)设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去TMB空白显色孔的吸光值后,在坐标纸上画出曲线,以吸光值作为纵坐标,以浓度作为横坐标。
② 将零孔设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去零孔的吸光值后,得到的数据可以直接在坐标纸上画出曲线。
1.已稀释好的ABC和TMB显色液在加入酶标板孔前都应预先在37℃中平衡至少30分钟。试剂或样品稀释时,切不可忘记混匀。每次检测都应该做标准曲线。用户须估计样品待测因子的含量,决定适当的稀释倍数。
确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目,并增加1孔作为TMB空白显色孔。总数=样品数+9;做双份检测时×2。其余重包装好放入冰箱中。
2.将2000pg/ml,1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.2pg/ml的标准品各100μL依次加入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为零孔。对于人血清、血浆、尿液、细胞裂解液或细胞培养上清,直接加已用样品稀释液稀释的样品100μL。
3.酶标板加上封板膜,37℃反应90分钟。
4 .反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。不洗。
5.将准备好的生物素抗人renin抗体工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白显色孔除外)。
6.酶标板加上封板膜,37℃反应60分钟。
7.1X洗涤缓冲液洗涤3次,每次浸泡1分钟左右(每孔洗液至少300μL)。
8.将准备好的ABC工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白显色孔除外)。
9.酶标板加上封板膜,37℃反应30分钟。
10.1X洗涤缓冲液洗涤5次,每次浸泡1~2分钟左右(每孔洗液至少300μL)。
11.按每孔90μL依次加入已在37℃平衡30分钟的TMB显色液,37℃避光反应25~30分钟。
注意:显色时间供参考,因用户实验室条件差异,最佳显色时间会有所不同。此时肉眼可见标准品的前3~4孔有明显的梯度蓝色,后3~4孔差别不明显。12.按每孔100μL依次加入终止液,此时蓝色立转黄色。
13.用酶标仪在450nm测定O.D.值。
14.有两种设定空白对照的方案:① 将TMB空白显色孔(只加TMB显色液和终止液)设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去TMB空白显色孔的吸光值后,在坐标纸上画出曲线,以吸光值作为纵坐标,以浓度作为横坐标。
② 将零孔设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去零孔的吸光值后,得到的数据可以直接在坐标纸上画出曲线。
根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N。
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