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层粘蛋白α5抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg的制备过程

发表时间:2022-04-11
层粘蛋白α5抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg的制备过程:

1. 免疫原:普通的大分子蛋白,联祖通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫动物:常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集:一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采血,家兔、山羊、绵羊可采用采血。

4. 免疫血清的纯化与鉴定:得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。

5. 免疫血清的保存:抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
操作要点

1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;

2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;

3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;

4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);

5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;

6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。

含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族17抗体
含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族12抗体
钠钾ATP酶通道蛋白抗体
AGXT2L2蛋白抗体
β淀粉样蛋白胞内结构域相关蛋白1抗体
锚蛋白重复及SAM结构域蛋白6抗体
二磷酸腺苷核糖基转移酶3抗体
二磷酸腺苷核糖基转移酶5抗体
腺苷单磷酸脱氨酶1抗体
红细胞蛋白Ank1抗体
腺苷酸琥珀酸裂解酶抗体
α1B糖蛋白抗体
载脂蛋白B-mRNA编码蛋白抗体
凋亡诱导因子3抗体
凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗体
凋亡诱导蛋白D抗体
酸性神经鞘磷脂酶抗体
腺嘌呤核苷酸转运蛋白1抗体
肌萎缩侧索硬化2染色体区域候选蛋白8抗体
ATP酶H+转运溶酶体辅助蛋白2抗体
肝素结合蛋白/阳离子抗菌蛋白37/天青杀素抗体
核突触蛋白抗体
β-肌动蛋白/β-Actin 抗体(内参抗体)
β淀粉样肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)抗体
β淀粉样肽1-16/Aβ1-16抗体
β淀粉样肽1-28/β-Amyloid 1-28抗体
激活素受体2A抗体
水通道蛋白5抗体
β淀粉样肽(1-40)抗体


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