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TGF-βR2试剂盒标本激活方法
发表时间：2022-01-19
TGF-βR2试剂盒标本激活方法:
1. 将450ul 标本稀释液加入到一支 1.5ml 进口聚丙烯管中 , 再加 10ul 血清或血浆标本。
2. 加20ul 1 N HC I ,盖紧，上下混匀。 2 － 8 ℃ 放置60± 2 分钟。
3. 加20ul 1 N NaOH, 盖紧，上下混匀。
4. 即用，或放-20/-70 ℃ 保存3 天。计算结果时乘 以稀释倍数 50 。 （ 注意：不同的标本E2F1 的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度）
5. 细胞培养上清或组织匀浆 10 倍稀释 (410ul 的标本稀释液＋ 50ul 样本＋ 20ul 的 1N HCI+20ul 的 1N NaOH) 。
检测程序
1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品（已激活） 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。
3. 每孔中加入第一抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗处反应15 分钟。
8. 每孔加入100ul 终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。
小鼠垂体瘤细胞(分泌促生长激素分泌激素)；AtT-20
小鼠小胶质细胞；BV2
小鼠骨髓瘤细胞；Fox-NY
小鼠胚胎成纤维细胞；MEF
小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞)；YAC-1
野生型人c-kit受体细胞株；A7d
小鼠原B细胞株；BaF3
小鼠脑瘤细胞；BC3H1
小鼠成肌细胞；C2C12
小鼠肝癌细胞；Hepa 1-6 [Hepa1-6]
小鼠肥大细胞瘤细胞；P815
小鼠胚胎成纤维细胞；3T6-Swiss albino
小鼠胚胎成纤维细胞；C3H 10T1/2 2A6
小鼠树突状细胞肉瘤细胞；DCS
小鼠淋巴瘤细胞；EL4
小鼠前胃癌细胞；MFC
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞；RAW 264.7 [RAW264.7
小鼠胚胎成纤维细胞；3T3-L1
小鼠乳腺癌细胞；CCC-Ca761-03
小鼠胚胎成纤维细胞；BALB/C 3T3
小鼠淋巴细胞白血病；L1210
小鼠肺腺癌细胞系；LA795
C3H/An小鼠结缔组织细胞（L929-TK-）；LTK-
小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞；SH2
小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞；SH3
1. 将450ul 标本稀释液加入到一支 1.5ml 进口聚丙烯管中 , 再加 10ul 血清或血浆标本。
2. 加20ul 1 N HC I ,盖紧，上下混匀。 2 － 8 ℃ 放置60± 2 分钟。
3. 加20ul 1 N NaOH, 盖紧，上下混匀。
4. 即用，或放-20/-70 ℃ 保存3 天。计算结果时乘 以稀释倍数 50 。 （ 注意：不同的标本E2F1 的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度）
5. 细胞培养上清或组织匀浆 10 倍稀释 (410ul 的标本稀释液＋ 50ul 样本＋ 20ul 的 1N HCI+20ul 的 1N NaOH) 。
检测程序
1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品（已激活） 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。
3. 每孔中加入第一抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗处反应15 分钟。
8. 每孔加入100ul 终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。
小鼠垂体瘤细胞(分泌促生长激素分泌激素)；AtT-20
小鼠小胶质细胞；BV2
小鼠骨髓瘤细胞；Fox-NY
小鼠胚胎成纤维细胞；MEF
小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞)；YAC-1
野生型人c-kit受体细胞株；A7d
小鼠原B细胞株；BaF3
小鼠脑瘤细胞；BC3H1
小鼠成肌细胞；C2C12
小鼠肝癌细胞；Hepa 1-6 [Hepa1-6]
小鼠肥大细胞瘤细胞；P815
小鼠胚胎成纤维细胞；3T6-Swiss albino
小鼠胚胎成纤维细胞；C3H 10T1/2 2A6
小鼠树突状细胞肉瘤细胞；DCS
小鼠淋巴瘤细胞；EL4
小鼠前胃癌细胞；MFC
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞；RAW 264.7 [RAW264.7
小鼠胚胎成纤维细胞；3T3-L1
小鼠乳腺癌细胞；CCC-Ca761-03
小鼠胚胎成纤维细胞；BALB/C 3T3
小鼠淋巴细胞白血病；L1210
小鼠肺腺癌细胞系；LA795
C3H/An小鼠结缔组织细胞（L929-TK-）；LTK-
小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞；SH2
小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞；SH3
