小鼠糖类抗原199(CA199)ELISA试剂盒操作步骤

小鼠糖类抗原199(CA199)ELISA试剂盒操作步骤:

1.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

3.         配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

4.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

5.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

6.         温育：操作同3。

7.         洗涤：操作同5。

8.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

9.         终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

10.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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