瓜类细菌性果斑病菌探针法荧光定量PCR试剂盒反应五要素

瓜类细菌性果斑病菌探针法荧光定量PCR试剂盒反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

 斯氏李斯特氏菌
 侧孢短芽孢杆菌
 乳酸乳球菌乳亚种
 牙龈卟啉单胞菌
 菩提奇异球菌
 干燥棒杆菌
 屎肠球菌(屎链球菌)
 具核梭杆菌多形亚种
 脆弱拟杆菌
 齿双歧杆菌
 粘性放线菌
 植物乳杆菌植物亚种
 迟缓爱德华氏菌
 哈氏弧菌
 Hydrotalea flava
 萎缩芽孢杆菌
 血链球菌
 醋酸醋杆菌
 伊氏李斯特氏菌
 英诺克李斯特氏菌
 红曲霉
 不动杆菌
 食酸菌
 短波单胞菌
 多头霉
 掘氏疫霉
 烟草疫霉
 副球菌
 溶藻细菌
 假单胞菌
 芽孢杆菌
 大肠杆菌
 酸土脂环芽孢杆菌